疟疾是世界范围内危害最严重的一种蚊媒寄生虫病,尤其对非洲、南美以及东南亚地区产生极大危害,为全球性重要的公共卫生问题。目前全球约40%的人口受该病威胁。据WHO报告,2009年全球有2.25亿疟疾病例,死亡约78.1万人。疟疾也是严重危害我国人民身体健康和生命安全、影响社会经济发展的重要寄生虫病。为切实保障广大人民群众身体健康,促进经济与社会协调发展,响应联合国千年发展目标高级别会议提出的在全球根除疟疾的倡议,2010年我国政府已启动全国消除疟疾工作,到2015年大部分地区消除疟疾,到2020年全国实现消除疟疾的目标。林芝地区是西藏自治区唯一有疟疾发生与流行的地区,其所辖的墨脱县和察隅县历来是疟疾流行区,自1986-2008年累计报告疟疾病例2296例。2005年7月,曾在林芝地区出现疟疾暴发,经过卫生部委派的专家组对林芝地区开展的调查结果表明,林芝地区的墨脱县、察隅县为低海拔的热带从林地区,居民带虫调查疟原虫血检阳性率和人群疟疾抗体水平均较高,说明当地的流行程度较高,属于疟疾的地方性流行区,目前发病率居全国前列。根据历年发病情况和血检调查,该地区以间日疟传播为主,但也不排除存在少量恶性疟病例。不同地理株间日疟原虫在对传播媒介的感染力、宿主的免疫原性等方面可能不同,特别林芝地区特殊的地理条件和生态环境可能性存在疟原虫多态性。本研究应用分子生物学方法对西藏林芝地区间日疟原虫进行多态性研究将为当地制定疟疾防治策略提供依据。本研究应用PCR-RFLP方法和微卫星技术对现场采集的间日疟原虫样本进行虫种多态性研究。从墨脱县和察隅县共采集35份疟原虫滤纸血样本,采用Chelex-100煮沸法提取DNA,以疟原虫属特异和种特异引物采用巢氏PCR方法对提取产物做鉴定验证,经巢氏PCR方法验证所采得样本均为间日疟样本,未发现恶性疟或间日疟、恶性疟混合感染样本。以PvMSP-3α特异性引物,对上述间日疟原虫阳性样本进行巢氏PCR扩增,扩增产物分别应用Hha Ⅰ限制性内切酶和Alu Ⅰ限制性内切酶进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),结果发现当地PvMSP-3α基因只有1型(1900bp,占90.3%)和Ⅱ型(1500bp,占9.7%)两种类型,未见其他地区报道的Ⅲ型。PvMSP-3α的扩增目的条带用Hha Ⅰ限制性内切酶进行酶切,Ⅰ型和Ⅱ型酶切后在1000bp处均出现了清晰的条带。Ⅰ型酶切后出现6种不同的亚型,其中最常见的是在1000bp、400bp和200bp处出现条带。Ⅱ型酶切后产生1种亚型。PvMSP-3α的扩增目的条带用Alu Ⅰ限制性内切酶进行酶切, Ⅰ型和Ⅱ型酶切后在500bp处均出现了清晰的条带。Ⅰ型酶切后出现4种不同的亚型,其中最常见的是在500bp、200bp和150bp处出现条带。Ⅱ型酶切后产生1种亚型。选择位于间日疟8号染色体上的一个核心重复单位为7个碱基的微卫星位点,设计扩增该微卫星位点的特异引物对上述间日疟原虫进行扩增和产物分析。该微卫星位点设计3条引物,其中1条为荧光标记引物。采用半巢氏PCR方法扩增该微卫星位点,第二轮PCR采用荧光标记引物,将PCR产物进行GENESCAN检测。检测得到不同的片段长度,代表该微卫星等位基因的不同类型。该微卫星位点扩增片段类型分析结果发现纯合型25个,杂合型7个,期望杂合度为0.23±0.35。研究结果表明,西藏林芝地区的间日疟原虫遗传多态性较低,未出现明显遗传分化。但由于西藏林芝地区特殊的地理、生态环境,而且当地交通极为不便,一旦发生本地疟疾感染病例或有输入性疟疾病例,如果加上疾病控制基础设施薄弱,疟防专业队伍不完善,当地居民就医困难,当地又存在高密度的传疟媒介,易造成疟疾的暴发流行,需引起高度重视。