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目的:激活血管紧张素转化酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)/血管紧张素1-7(Angiotensin 1-7,A1-7)/Mas信号通路可以改善胰岛微循环,保护β细胞。然而,其活化是否减少代谢应激下β细胞去分化,目前并未见报导。本实验主要探讨该通路对β细胞去分化的影响。方法:1.根据Cre/Loxp原理,建立β细胞遗传谱系标记技术。采用PCR和免疫荧光技术鉴定β细胞遗传谱系标记技术的建立。2.高脂饲养β细胞遗传谱系标记小鼠,行腹腔注射葡萄糖耐量试验(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)和腹腔注射胰岛素耐量试验(intraperitoneal insulin tolerance test,IPITT)检测小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性,采用免疫荧光和q-PCR技术观察β细胞分化状态,并检测胰岛局部ACE2/A1-7/Mas轴活性。3.建立体内外代谢应激模型,通过ACE2基因敲除或通过外源给予A1-7调控ACE2/A1-7/Mas轴活性,观察ACE2/A1-7/Mas信号通路对β细胞去分化的影响。应用IPITT和IPGTT检测体内糖代谢变化,采用葡萄糖刺激胰岛素释放试验(glucose stimulated insulin secretion,GSIS)检测体外培养的原代胰岛分泌功能。运用免疫荧光和q-PCR技术鉴定ACE2/A1-7/Mas轴信号通路的活性和β细胞分化状态。用胰腺切片进行VEGF和iNOS免疫组化染色,评价胰岛微循环的改变与氧化应激程度。结果:1.PCR鉴定阳性的β细胞遗传谱系标记小鼠胰腺组织免疫荧光结果显示约96%胰岛素阳性的细胞也表达EGFP,表明β细胞遗传谱系标记技术成功建立。2.高脂喂养导致β细胞遗传谱系标记小鼠体重增加明显,并出现了严重的糖耐量受损和胰岛素抵抗,成熟的β细胞显著减少,β细胞发生去分化。去分化的β细胞可转分化为α细胞。3.高脂饲养不仅导致小鼠胰岛β细胞出现去分化,而且伴随着ACE2下调。4.ACE2主要在α细胞表达,Mas受体主要在分布于β细胞中,α细胞产生的ACE2可能调控β细胞功能。5.高脂喂养的ACE2基因敲除(ACE2KO)小鼠体重增长迅速,而A1-7干预能够减缓高脂诱导的C57BL/6J小鼠体重的增长。6.ACE2敲除加重高脂喂养小鼠的胰岛素抵抗和葡萄糖耐量受损。同时,体外研究发现阻断ACE2信号加重高糖培养的原代胰岛的β细胞功能障碍。相反,A1-7干预显著改善代谢应激状态下的C57BL/6J小鼠和离体胰岛葡萄糖代谢紊乱和胰岛功能障碍。7.ACE2敲除加重高脂诱导的β细胞去分化加重。然而,A1-7干预减轻代谢应激状态下C57BL/6J小鼠和高糖培养离体胰岛β细胞去分化程度。8.此外,A1-7干预改善高脂喂养C57BL/6J小鼠胰岛微循环和减轻胰岛氧化应激。结论:1.代谢应激诱导β细胞去分化。2.ACE2/A1-7/Mas信号可能是α细胞和β细胞对话的旁分泌机制。3.激活ACE2/A1-7信号可能通过改善胰岛微循环和减轻胰岛氧化应激减轻代谢应激下的β细胞去分化。