山莨菪碱对心脏骤停猪心肌超微结构损伤及细胞间信号传导的保护作用

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rdx200901as
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目的通过氧自由基代谢、线粒体途径和内质网途径心肌细胞凋亡的研究,观察山莨菪碱对心脏骤停(CA)和复苏后心肌超微结构损伤的保护作用;并观测山莨菪碱对复苏后心肌细胞间信号传导结构和功能的影响。方法1.健康家猪23只随机分为对照组(n=5)、肾上腺素组(n=9)和山莨菪碱组(n=9)。电刺激法建立心脏骤停模型,室颤9min后心肺复苏,山莨菪碱组为复苏过程中联合应用山莨菪碱。计算并比较两组心脏骤停猪的心肺复苏(CPR)时间及ROSC成功率。2.在基础时点、CA8min、自主循环恢复(ROSC)即刻、ROSC30min和ROSC24h留取血液标本,ROSC24h处死动物留取心肌组织标本。分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量;ELISA氵去测定细胞色素C及Caspase-3蛋白含量。3.透射电镜下观察心肌组织超微结构;Hoechest33258染色测定心肌细胞凋亡率;RT-PCR和Western Blot方法测定心肌Caspase-12、氨基末端激酶(JNK)和calpain mRNA含量和蛋白表达量。4.免疫荧光染色法测定心肌组织Cx43表达水平和分布;RT-PCR和Western Blot方法测定心肌组织总Cx43、Calpain mRNA含量和蛋白表达量,并测定总Cx43中p-Cx43的蛋白表达量。结果1.山莨菪碱组ROSC成功率77.78%较肾上腺素组55.56%提高22.22%,山莨菪碱组CPR时间较肾上腺素组缩短近100s,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.①山莨菪碱组心肌SOD活力明显高于肾上腺素组(P<0.01)。②山莨菪碱组ROSC30min、ROSC24h血浆MDA含量较肾上腺素组减少(P<0.05)。③山莨菪碱组ROSC30min、ROSC24h血浆CytoC蛋白含量较肾上腺素组减少(P<0.05)。④两复苏组血浆各时点及心肌Caspase-3蛋白含量均无显著差异(P>0.05)3.肾上腺素组心肌细胞内线粒体、内质网和细胞核损伤严重。山莨菪碱组细胞超微结构损伤较肾上腺素组明显减轻,细胞器和细胞核形态基本正常。山莨菪碱负调控caspase-12,JNK和Calpain mRNA含量及蛋白表达量。4.山莨菪碱组心肌纤维排列较规整,Cx43荧光信号高于肾上腺素组(P<0.05);山莨菪碱组Calpain mRNA含量和蛋白表达量均低于肾上腺素组(P<0.05);两复苏组Cx43mRNA含量和蛋白表达量无统计学差异;山莨菪碱组p-Cx43蛋白表达量高于肾上腺素组(P<0.01),接近于对照组(P>0.05)。各组组间p-Cx43/Cx43无显著差异(P>0.05)。结论1.经右心室电刺激法是建立心室纤颤心脏骤停模型的有效方法;室颤9min后进行复苏,山莨菪碱可以缩短复苏时间近100s,可以提高复苏成功率22.22%。2.山莨菪碱可以改善心脏骤停复苏后氧自由基代谢紊乱,并通过抑制线粒体途径和内质网途径的心肌细胞凋亡,减轻复苏后心肌超微结构损伤程度。3.山莨菪碱通过上调总Cx43中p-Cx43的表达量,保护心脏骤停复苏后心肌细胞间信号传导结构及功能。
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