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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)隶属于十足目(Decapoda)、爬行亚目(Reptantia)、方蟹科(Grapsidae)、绒螯蟹属(Eriocheir),俗称河蟹、大闸蟹。其苗种多分布于东部沿海,以及北起辽河口,南至广东省。近年来,各地广泛开展了人工蟹苗的培育和成蟹的养殖,为了增加养殖产量,目前极需了解河蟹的生殖、生长与蜕壳的生理生态变化的规律性,而此种动态的规律性变化又无不与河蟹分泌的激素调控密切相关。而如果通过外源给予雌激素可以调控河蟹的发育,那么在生产中无疑是有很大前景的。因此,本实验给予中华绒螯蟹幼体,成体外源雌激素,统计其生长,发育各项指标,从而了解外源雌激素的影响效果。这为弄清内外源雌激素问关系及其对甲壳动物性腺发育的影响提供理论依据,为中华绒螯蟹性腺发育激素调控的研究提供基础资料,同时也为研究环境内分泌干扰物对甲壳类动物繁殖生存的影响奠定基础。
本实验通过对中华绒螯蟹幼体采用17β-雌二醇(17β-estradiol)药浴,观察其蜕壳时间,存活率,以及对其生长的影响;对性腺发育高峰期(9月-11月)中华绒螯蟹外源注射17β-E2;对性早熟中华绒螫蟹外源注射17α-羟基孕酮;以及对实验的卵巢组织采取免疫组织化学方法,并采用活体解剖观察、石蜡切片及等手段,系统研究了雌激素对中华绒螫蟹生长,发育的影响。研究结果如下:
1.17β-雌二醇对中华绒螯蟹幼体发育的研究
1)17β-E2可以缩短中华绒螫蟹幼体溞Ⅰ变溞Ⅳ,仔Ⅱ变仔Ⅴ时的变态时间;
2)17β-E2对中华绒螯蟹幼体外部特征(甲长和甲宽)没有明显影响;
3)17β-E2对中华绒螫蟹幼体中17β-E2浓度无影响。
2.外源17β-E2对中华绒螫蟹卵巢发育和内源雌激素水平的影响
1)在卵巢发育Ⅲ期1-Ⅳ期间,17β-E2有呈剂量依赖性促进中华绒螯蟹卵巢发育的特点,表现为:性腺指数增大,卵细胞发育快,卵细胞直径增大;
2)中华绒螯蟹血淋巴中17β-E2含量,有随卵巢发育逐渐降低的趋势,尤其在实验30d后有明显的下降;
3)对血淋巴和卵巢中17β-E2的含量与性腺指数进行相关性分析后发现:血淋巴和卵巢中17β-E2含量与性腺指数均呈极显著负相关;
4)外源17β-E2能促进卵巢发育,能明显增加血淋巴中17β-E2含量,而降低Ⅲ期1卵巢内17β-E2含量。
3.中华绒螯蟹不同卵巢发育阶段中雌二醇受体(ER)的免疫识别
1)在中华绒螯蟹雌蟹卵巢发育高峰期的卵母细胞中存在着雌二醇受体;
2)在卵巢发育到Ⅲ期1(即三期早期),雌二醇受体主要分布于胞质;在卵巢发育到Ⅲ期2(三期晚期)-Ⅳ期时,雌二醇受体主要分布于核。
4.17α-羟基孕酮对性早熟中华绒螯蟹主要体征和卵巢发育影响的初步观察
1)17α-羟基孕酮对性早熟中华绒螯蟹外部特征(甲长和甲宽)没有明显影响;
2)较高剂量组10-1mg/g剂量的17α-羟基孕酮能明显促进性早熟中华绒螯蟹卵巢的早期发育(15d),卵巢指数和卵母细胞长径均比对照组有显著性增高;外源给予孕酮能促进性早熟中华绒螯蟹性腺的早期发育.