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落叶松属植物(Larix spp.)在我国分布广泛,是我国速生丰产用材林的重要树种。亚洲落叶松八齿小蠹(Ips subelongatus Motschulsky)是一种危害落叶松的蛀干害虫,主要分布于我国东北和华北地区。作为我国林业危险性有害生物,危害枯立木和健康树种,对落叶松林造成了巨大的损失。小蠹虫与真菌能够形成稳定的伴生关系,伴生真菌对于削弱寄主树木抗性、协助小蠹虫侵害树木、维护小蠹虫种群密度等方面起着重要的作用,其中许多伴生真菌是具有强致病力的重要植物病原物。基于上述论述,开展本项研究,以期为有效控制落叶松八齿小蠹的危害提供理论依据。本研究在前期研究的基础上选择了落叶松八齿小蠹伴生真菌区系中的优势种(Ophiostoma kryptum,Endoconidiophora fujiensis,O.cf.bicolor,O.brunneociliatum),人工接种于华北落叶松(L.prineipis-rupprechtii)成年(40年生)植株上,模拟小蠹虫侵入寄主的方式,采用高密度接种方法和低密度接种方法进行致病性的测定。结合前人研究结果和致病性研究结果,根据Harrington等人的方法将来自华北落叶松、长白落叶松和兴安落叶松的E.fujiensis和O.kryptum的菌株人工接种于分布在不同地区的三种落叶松及日本落叶松上进行致病力差异测定。根据致病性结果对强致病力真菌进行快速特异性的检测。同时对分布在不同地区的长白落叶松,兴安落叶松和华北落叶松三种森林生态系统中发生的八齿小蠹的虫体和坑道组织进行伴生真菌的分离纯化,进行生理学特性、菌落特征、微观形态学的观察,以及多位点DNA序列的系统发育分析,明确了落叶松八齿小蠹伴生真菌区系中Graphium属和Leptographium属真菌组成。对伴生菌优势种致病性测定结果表明,O.kryptum的致病力最强,E.fujiensis次之,O.cf.bicolor和O.brunneociliatum致病力较弱。研究结果发现发现寄主为兴安落叶松的E.fujiensis菌株在华北落叶松上的致病性,明显弱于寄主为华北落叶松的菌株在其上的致病性,证明不同寄主的E.fujiensis菌株致病力可能存在差异。并且在中国落叶松上分离的O.kryptum菌株致病力与前人研究中寄主为欧洲落叶松的O.kryptum菌株致病力结果不同,说明其可能存在致病力差异。通过进一步对E.fujiensis和O.kryptum致病力差异测定,研究发现来自不同寄主的O.kryptum菌株对4种落叶松致病力差异不大,而来自分布在不同地区的3种落叶松寄主的E.fujiensis菌株致病力存在差异,其中来自华北落叶松的菌株致病力最强,来自长白落叶松的菌株次之,来自兴安落叶松的菌株最差。表明菌株在致病性上具有致病性分化特征,结合前期的多基因序列研究,E.fujiensis可能存在着寄主长期胁迫下的种下分化现象。进一步研究发现来自中国3种落叶松的E.fujiensis的所有菌株对日本落叶松的致病力大于对中国本地落叶松的致病力,对日本落叶松表现为强致病菌,与日本国内的测定结果相一致,而O.kryptum菌株对中国本地落叶松和日本落叶松致病力相同,说明E.fujiensis对日本落叶松具有强致病力。相比日本落叶松的感病性,我国本地落叶松与病原的协调进化过程中演化出了稳定的抗病性。通过形态学鉴定和基于ITS2-LSU、β-tubulin和TEF-1α基因序列的系统发育分析,分离到Leptographium属真菌3种,其中2种为新种,分别定名为Leptographium zhangense Liu,Lu&Zhang sp.nov.和Leptographium innermongoliaae Liu,Lu&Zhang sp.nov.,另外1种是L.taigense,系首次在中国发现。L.zhangense,属于Leptographium piceiperda种复合体,在系统发育分析中与L.piceaperda和L.aenigmatica具有较近的亲缘关系,而在形态上与L.laricis相似,二者相比子囊颈长宽度和子囊孢子的形状大小存在差异。L.innermongoliaae与L.taigense亲缘关系较近,二者形态上都具有synnematous无性型。两个新种分别从菌落特征、生长速率、分生孢子等方面与现有Leptographium属种形态近似种区分。3种Leptographium属真菌均在寄主为兴安落叶松的韧皮部分离得到,为亚洲落叶松八齿小蠹与长喙壳类真菌的新伴生关系。通过形态学鉴定和系统发育分析,共分离到Graphium属真菌2种:G.laricis和G.carbonarium,其中G.laricis为中国新纪录种。G.laricis和G.carbonarium都属于G.penicillioides种复合体,二者都是首次从亚洲落叶松八齿小蠹上分离到,与落叶松八齿小蠹形成新的小蠹虫-真菌伴生关系,并且增加了两种真菌的寄主种类,扩大了其分布范围和寄主的种类。基于对落叶松八齿小蠹伴生菌区系和致病性的研究,选择强致病力优势种O.kryptum和E.fujiensis对其进行快速特异性PCR检测,分别筛选出特异性引物对OK1/OK2和CFU1/CFU2。引物对OK1/OK2对于O.kryptum菌株均表现有1条248bp的清晰明亮条带,而其他菌种则无该条带。引物对CFU1/CFU2对于E.fujiensis菌株均表现有1条251bp的清晰明亮条带,而其他菌种则无该条带。使用特异性引物能够直接从木块标本的混合DNA中检测出O.kryptum和E.fujiensis,缩小了工作时间,提高工作效率并且还能检测费用低,并且该技术对检测仪器的要求不高,容易在实际工作中推广应用。