GPX2在食管癌中的表达及其预后意义

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背景和目的:  谷胱甘肽过氧化物酶2(glutathione peroxidase2,GPX2)又称为胃肠特异型谷胱甘肽过氧化物酶,主要表达于胃肠道,在人类还表达于食管和肝脏,其基本功能是抗氧化损伤。目前研究发现,GPX2在结直肠癌、Barrett’s食管、鳞状上皮细胞致瘤性转化、肺癌、肝癌,乳腺癌和雄激素依赖性前列腺癌等肿瘤中高表达,关于GPX2表达与肿瘤之间关系的研究方兴未艾。然而,GPX2在食管癌中的表达,及其与食管癌发生发展之间的关系以及在食管癌形成过程中所发挥的作用却鲜有报道。  食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,在世界范围内,是第八大常见肿瘤,第六大癌症致死原因。在我国,广东省潮汕地区是食管癌高发区之一,其严重威胁了当地居民的健康与生命。本研究主要采用HE染色、免疫组织化学、细胞培养、Western blot和RT-PCR等实验方法。通过检测GPX2在正常食管粘膜上皮细胞系中的表达,探讨硒对GPX2表达的影响;通过检测GPX2和8-OhdG在食管癌和食管粘膜组织中的表达,探讨GPX2与食管癌发生发展之间的关系及其在食管癌形成过程中所发挥的作用;本研究还探讨了GPX2的表达对食管癌患者预后的影响。  材料与方法:  材料:  收集汕头大学医学院病理科2002年及2011-2012年间165例术前未经放化疗食管癌患者的手术标本,其中随访85例食管癌患者,还有70例食管癌患者手术标本配有癌旁食管粘膜组织。此70例食管癌患者手术配对标本均在肿瘤、肿瘤旁粘膜(距肿瘤2厘米内)及远端切缘粘膜(距肿瘤5厘米外)等三处取材,分别标记为Ca、P、N。故P和N组织标本共140例,除去8例贲门部位粘膜,实际统计为132例。  收集汕头大学司法鉴定中心尸检取材获得的正常食管粘膜标本6例,其中取自婴儿和成人各3例。  NE3正常食管上皮永生化细胞系为香港大学曹教授惠赠。  方法:  1.HE染色:观察食管癌的组织学类型、分化程度、浸润深度以及淋巴结转移等情况,观察食管癌癌旁粘膜和远端切缘粘膜组织学类型及炎症细胞浸润程度等情况。  2.免疫组化染色:采用Envision两步法检测食管癌、癌旁粘膜及远端切缘粘膜中GPX2蛋白和8-OhdG的表达。  3.细胞培养:培养NE3正常食管粘膜上皮永生化细胞系,建立硒模型。  4.Western blot:检测食管癌、癌旁粘膜及远端切缘粘膜新鲜组织标本GPX2的表达情况。  5.RT-PCR:检测食管癌、癌旁粘膜及远端切缘粘膜新鲜组织标本GPX2 mRNA的表达情况。  6.图像采集:使用Leica DMRXA2全能显微镜和Leica IM50图像采集系统对染色结果进行拍照分析。  7.统计分析:利用SPSS19.0对实验数据进行统计分析,采用了?2检验、相关分析、Log-rank检验,趋势检验和Cox回归模型等方法。P值<0.05时有统计学意义。  结果:  1.炎症等级与食管粘膜上皮异常增生之间存在正相关(P=0.000,P<0.01),Spearman相关系数r=0.640。  2.随正常食管粘膜、食管上皮异常增生到食管癌的过程中,8-OhdG的表达逐渐增加。  3.随硒浓度的增加,GPX2的表达明显增加。  4.随正常食管粘膜、食管上皮异常增生到食管癌的过程中,GPX2的表达逐渐增加。而在低分化型的食管癌中,GPX2呈阴性表达。  5.GPX2表达是食管癌患者能否长期生存的独立影响因素,也是食管癌的死亡危险因素,GPX2阴性表达者的死亡风险是GPX2阳性表达者的3.362倍。  结论:  1.炎症程度越重,食管粘膜上皮内瘤变级别越高,氧化损伤也随之加重。  2.在食管癌发生发展过程中,GPX2的表达逐级增加,GPX2发挥抗氧化损伤和抑制肿瘤形成的同时,也可能具有促进细胞增殖的作用。GPX2在低分化型的食管癌中阴性表达。硒能增加GPX2在NE3细胞系中的表达。  3. GPX2表达阴性的食管癌患者预后差。
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