沉默环状RNA hsacirc0004491表达对口腔鳞癌细胞迁移及侵袭能力影响的实验研究

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研究目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔恶性肿瘤中最为常见之一,其发病率在不同癌症中排位第八,患者五年生存率一直维持在63%左右,但目前对口腔鳞癌的发病机制仍然是不明朗的、晚期OSCC患者的预后仍是不理想的。近年来在哺乳动物中广泛检测到环状RNA(circular RNA,circ RNA),并且越来越多的数据已经证实了circ RNA与癌之间的相关性。本研究,旨在检测环状RNA hsacirc0004491在口腔鳞癌细胞系内的表达情况,并研究其对口腔鳞癌细胞系迁移和侵袭的影响,并探讨其可能相关的分子机制。研究方法:采用定量PCR(qRT-PCR)检测hsacirc0004491在口腔鳞癌细胞系(SCC-15、SCC-25、CAL-27)及人口腔角化细胞(HOK)的相对表达含量,以环状RNA hsacirc0004491基础表达量较低的口腔鳞癌细胞系作后续研究对象;设计si RNA与ctrl-si并转染至细胞内,检测转染后的沉默效率;采用CCK-8和EDU增殖实验检测沉默环状RNA hsacirc0004491对口腔鳞癌细胞的增殖能力的影响;采用细胞划痕实验和transwell实验检测沉默hsacirc0004491对口腔鳞癌细胞侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot实验检测沉默hsacirc0004491对细胞迁移和侵袭相关蛋白的表达情况的影响。结果:通过qRT-PCR检测hsacirc0004491在4株细胞系(HOK、SCC-15、SCC-25、CAL-27)中表达含量,其中在SCC-15和CAL-27内相对表达含量明显降低,选作为后续实验的细胞系。通过设计沉默si RNA并转染至SCC-15、CAL-27细胞系中,结果显示:沉默si RNA组与空白ctrl-si组对比,沉默效率分别为:SCC-15沉默效率约80%;CAL-27沉默约65%左右。CCK-8和EDU增殖实验结果均显示沉默hsacirc0004491后,沉默处理组处于增殖期的细胞数目与对照组无明显差异,统计学无意义。划痕结果显示:SCC-15及CAL-27细胞系中,沉默circ RNA的处理组较对照组划痕迁移细胞数目增多,且迁移速度增快,具有统计学意义(SCC-15**,P<0.01;CAL-27***,P<0.001)。Transwell迁移实验结果显示:SCC-15及CAL-27细胞系中,干扰组较对照组穿过小室底的细胞数目增多,具有统计学意义(**,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果提示:SCC-15及CAL-27细胞系中,沉默组较对照组穿过小室底的细胞数目显著增多(***,P<0.001)。Western blot蛋白实验结果提示:SCC-15及CAL-27细胞系中,沉默circ RNA的处理组较对照组中E-cadherin的表达水平明显降低,Vimentin的表达水平明显升高。结论:通过沉默环状RNA hsacirc0004491的表达水平可以促进口腔鳞癌细胞系SCC-15和CAL-27的迁移、侵袭能力,hsacirc0004491可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展中起到一定作用。
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