柑橘采后致病青霉的分离鉴定及其生物学特性研究

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青霉菌是柑橘类水果采后主要致病菌,也可使多种果蔬腐烂。目前,国内外大多数学者认为,引起柑橘采后腐烂的青霉菌为意大利青霉(Penicillium italicum Wehmer)与指状青霉(Penicillium digitatum Sacc)两种,但也有人提出不同的看法。本文对分离获得的柑橘采后致病青霉菌不同菌株间的形态学特征、致病力及生物学特性等方面进行综合性了研究,以期为柑橘采后致病青霉的快速鉴定及其病害的及早防治提供了有益的参考。主要研究结果如下:1.柑橘采后致病青霉菌的鉴定本研究应用rDNA-ITS分子标记分析和传统真菌形态学鉴定相结合的方法,对从不同产地分离获得的能引起柑橘贮藏期间腐烂的8株青霉菌(L、Q、PL、PQ、CL、CQ、PTY-1、PTY-2)进行了鉴定。结果表明:菌株PL与CL为指状青霉(Penicillium digitatum Sacc),菌株L为扩展青霉(Penicillium expansum(link)thom),菌株Q为产黄青霉(Penicillium chrysogenus Thom),PQ、CQ、PTY-1、PTY-2这4个菌株均为波兰青霉(Penicilliumpolonicum Thom)。2.青霉致病性试验结果表明:在一定范围内,青霉菌接种量与病害发生率呈正相关。分离到的8株柑橘致病青霉菌中,P.digitatum(PL、CL)对柑橘果实致病能力最强,条件适宜的情况下,从果实发病到全果腐烂只要7d~10d时间;其次为P.expansum(L);再次是P.polonicum(PQ、CQ、PTY-1、PTY-2);而P.chrysogenum(Q)的致病力最弱。伤口和带菌量是柑橘采后致病的关键因子。3.生物学特性1)同一菌株在不同培养基上或不同菌株在同一培养基上培养,平均日生长速率、产孢量、菌落颜色以及菌落厚度有显著不同。马铃薯葡萄糖培养基既有利于青霉菌菌丝体的良好生长,也有利于病原孢子的大量产生。2)青霉菌生长温度范围在5℃~35℃,菌丝体生长和孢子形成适宜温度为15℃~30℃,其中P.digitatum菌丝体生长最适温度为20℃,产孢的最适温度为25℃;P.chrysogenus和P.expansum菌丝体生长和孢子产生的最适温度均为25℃;P.polonicum均为20℃。对于同一青霉菌株来说,同一温度范围内,菌丝体生长快慢与产孢量基本成正比。3)光照条件对青霉菌菌丝体的生长和产孢能力的影响差异并不显著。4)青霉菌对多种单糖、双糖和多糖等碳源及有机氮、无机氮均可利用,其中P.digitatum、P.polonicum、P.expansum、P.chrysogenus最适碳源分别为葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖;最适氮源均为蛋白胨和酵母浸膏,硫酸铵和氯化铵会抑制病原菌菌丝生长。5)致死温度测定试验表明:青霉菌P.digitatum与P.expansum致死温度在70℃左右。P.polonicum的4个菌株之间存在一定差异,但并不显著,致死温度范围为75℃~85℃。6)随着紫外辐照时间的延长,青霉菌孢子致死率逐渐增加。相同紫外辐照条件下,青霉菌菌株间孢子致死率差异显著。经紫外辐照5min,8株青霉菌菌株的孢子致死率在40.00%~80.00%范围内,其中P.chrysogenum的抗紫外能力最强,辐照9min的孢子致死率仅为71.43%;P.expansum的抗紫外能力最弱,致死率高达90.00%;P.digitatum(PL与CL)致死率分别为88.00%,84.44%;P.polonicum紫外辐照9min,孢子致死率在85.00%左右,其4个不同菌株(PQ、CQ、PTY-1、PTY-2)间的抗紫外能力差异并不显著。7)采用7种常用的化学药剂进行药敏试验,其中20%咪鲜胺EC对四种青霉菌抑制效果最好;其次为松脂酸铜;而多菌灵、托布津等常用杀菌剂与保鲜剂2,4-D,单独使用对病原菌有一定的抑制作用,但混用后反而会降低药效;对人体无毒害作用的碳酸氢钠或氯化钙在离体上基本无抑菌作用。
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