【摘 要】
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目的:筛选前列腺癌(PCa)与正常前列腺组织之间差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),选取lnc-MX1-1为研究对象,探讨lnc-MX1-1对前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响,并进一步
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目的:筛选前列腺癌(PCa)与正常前列腺组织之间差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),选取lnc-MX1-1为研究对象,探讨lnc-MX1-1对前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响,并进一步探究其生物学作用的可能分子机制。方法:1、收集配对的前列腺癌及癌旁正常组织标本,利用表达谱基因芯片筛选癌与癌旁正常前列腺组织之间差异表达的lncRNAs;选取lnc-MX1-1作为研究对象,通过实时定量PCR(qRT-PCR)、RNA荧光原位杂交(RNA FISH)验证lnc-MX1-1在前列腺组织及细胞中的表达水平。2、利用RNA干扰技术(RNAi),设计能够干扰lnc-MX1-1表达的小干扰RNA(siRNA)和短发卡RNA(shRNA),构建慢病毒shRNA表达载体,建立lnc-MX1-1敲减的前列腺癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆实验以及裸鼠皮下成瘤实验研究抑制lnc-MX1-1表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响;通过细胞划痕实验、Matrige1侵袭实验以及裸鼠前列腺原位种植实验研究抑制lnc-MX1-1表达对前列腺癌细胞侵袭、转移能力的影响。3、构建lnc-MX1-1过表达慢病毒载体,建立高表达lnc-MX1-1的前列腺癌细胞株;利用基因表达谱基因芯片和microRNA(miRNA)芯片结合生物信息学分析分别研究过表达lnc-MX1-1后前列腺癌细胞中基因表达谱和miRNAs表达谱的变化。结果:1、基因表达谱芯片共筛选出366种lncRNAs在前列腺癌与癌旁正常外周带组织间差异表达,330种lncRNAs在前列腺癌与癌旁正常移行带组织间差异表达;其中lnc-MX1-1在癌组织中表达水平是正常外周带的15.06倍00.0000626),是正常移行带组织的 7.91 倍(P=0.0004001);qRT-PCR 以及RNA原位杂交进一步验证发现lnc-MX1-1在前列腺癌组织及细胞系中呈高表达(P<0.01)。2、LNCaP 细胞转染 siRNA(siMX-2)后,lnc-MX1-1 表达下调了 2.63倍(P<0.01),进一步利用慢病毒shRNA表达载体成功构建了低表达lnc-MX1-1的LNCapshMX和22Rv1shMX细胞株,与对照组相比,LNCaPshMX细胞和22Rv1shMX细胞中lnc-MX1-1的表达水平分别降低了 3.78倍(P<0.01)和5.03倍(P<0.01)。低表达lnc-MX1-1的细胞增殖、成瘤能力和侵袭、转移能力明显降低(P<0.05)。3、利用lnc-MX1-1过表达的慢病毒载体成功构建了高表达lnc-MX1-1的前列腺癌VC.aPMX细胞株,与对照组相比,VCaPMX细胞中lnc-MX1-1的表达水平上调了 309倍(P<0.001);基因表达谱芯片检测筛选发现差异基因654个,GO分析和KEGG分析提示lnc-MX 1-1对细胞信号传导、转录调控等相关基因及信号通路有密切联系;miRNA芯片筛选发现127种miRNAs发生差异性表达,提示lnc-MX1-1可能与前列腺癌细胞中多种miRNAs发生相互作用。结论::1、前列腺癌与癌旁正常前列腺组织之间存在多种差异表达的lncRNAs,其中lnc-MX1-1在前列腺癌组织和细胞中呈高表达。2、干扰Lnc-MXl-r可以抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力。3、Lnc-MX1-1对前列腺癌细胞生长的促进作用可能是通过调控细胞内信号传导、转录调控以及与肿瘤相关miRNAs的相互作用而实现的。本研究筛选了前列腺癌相关差异表达的lncRNAs,研究了lnc-MX1-1在前列腺组织、细胞中的表达水平,并且初步探索了其发挥作用的可能分子机制,为前列腺癌治疗寻找lncRNAs靶点奠定了一定的实验基础。
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