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目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响。
方法:取纯种新西兰大白兔20只,以各兔L2/3、L3/4、L4/5、L5/6节段分为正常组、退变组,成纤维细胞(SFs)移植对照组,MSCs移植治疗组。MSCs和SFs分别经绿色荧光蛋白(GFP)转染后,注射植入退变椎间盘的髓核。通过透射电镜观察退变椎间盘凋亡髓核细胞形态;用实时定量PCR检测退变组织中髓核细胞凋亡相关基因Bcl-2和BaxmRNA的表达;免疫荧光法标记髓核细胞凋亡相关蛋白caspase-3,并通过TUNEL法标记凋亡髓核细胞,激光共聚焦显微镜检测髓核细胞凋亡蛋白表达率和细胞凋亡比率。
结果:透射电镜下,退变椎间盘中凋亡髓核细胞呈现出核染色质边集,空泡形成,核膜断裂,凋亡小体形成等变化。MSCs移植治疗组Bcl-2 mRNA的表达量高于退变组和SFs移植对照组(P<0.05),Bax mRNA的表达量与退变组差异无统计学意义(P>0.05)。MSCs移植治疗组细胞凋亡率和caspase-3表达率均高于正常组(细胞凋亡率分别为(16.754±2.14)%和(6.864±1.08)%;caspase-3表达率分别为(20.344±1.03)%和(6.09±0.77)%)(P<0.05),低于退变组和SFs移植对照组(细胞凋亡率分别为(31.874±4.16)%和(29.024±2.16)%;caspase-3表达率分别为(31.504±3.78)%和(30.204±4.93)%)(P<0.05)。
结论:髓核细胞凋亡在椎间盘退变过程中起重要作用。MSCs移植能有效抑制椎间盘髓核细胞凋亡,延缓椎间盘退变进程。