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樟芝(Antrodia camphorata(M.Zang&C.H.Su)Sheng H.Wu,Leif Ryvarden&T.T.Chang)又称牛樟芝或牛樟菇,是全球最昂贵的野生药用真菌,为我国台湾特有的稀世珍宝,一直被誉为治疗肝病及癌症的神奇药王。樟芝寄生在台湾原始森林(海拔450～2000公尺)中特有的一级保育树种牛樟树的腐朽树干内壁或倒伏潮湿的牛樟木表面,有着“台湾森林中的红宝石”之美誉。早期原住民发现樟芝可用来解决宿醉、肝脏病变和体力透支等问题,现代研究证实其具有解毒保肝、消除肿瘤、补肾强心、益胃整肠、强化免疫、镇痛抗菌等作用,其主要活性成分为三萜类、多糖、核苷、脂类等成分。由于野生樟芝子实体稀少,加之人工栽培较为困难,因此,目前市售樟芝产品主要为具野生樟芝类似功效的固体发酵培养菌丝体粉末(樟芝菌粉)。本课题鉴于樟芝特有的疗效及保健功能,针对台湾市售樟芝菌粉质量参差不齐的情况,从生药鉴别、有效成分含量测定、指纹图谱分析及质量标准制订等方面,对樟芝菌粉进行较系统的品质评价研究,为樟芝菌粉内在质量的综合评价和全面控制以及樟芝药材鉴定提供了科学依据。课题研究内容主要包括以下几个方面:1、文献研究系统查阅樟芝的国内外相关文献,对樟芝进行文献综述研究。2、樟芝子实体的生药鉴定研究用传统鉴定方法和冰冻切片技术,对樟芝子实体进行性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别;采用显微化学反应法对樟芝子实体中多糖及三萜类成分进行了组织定位。结果表明,多糖类成分分布于整个子实体结构中,三萜类成分仅少量分布在菌管末端。3、樟芝菌粉有效成分的含量分析采用现代分析集成技术,对不同批次、不同发酵技术、不同厂家樟芝菌粉及樟芝胶囊、樟芝子实体进行了多种成分分析,并与灵芝进行了比较。建立了超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)和液相色谱-三重四级杆线性离子阱质谱(LC-QTRAP-MS)同时测定樟芝菌粉中核苷类成分的方法;采用顶空气质联用色谱法(HSGC-MS)对樟芝菌粉中挥发性成分组分及其相对含量进行了分析;用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定了樟芝菌粉中22种无机元素的含量;用高效液相色谱法(HPLC)分析了樟芝菌粉中20种游离氨基酸、18种结合氨基酸的含量。结果表明,不同批次樟芝菌粉间各成分含量几无差异,不同发酵技术(三萜含量较高的樟芝菌粉)和樟芝胶囊各成分的含量与不同批次菌粉间差异较小,樟芝子实体、广东樟芝菌粉和灵芝中各成分的含量基本都小于台湾不同批次菌粉。4、樟芝菌粉的指纹图谱研究研究建立了樟芝菌粉UPLC-Q-TOF-MS提取离子流和HSGC-MS总离子流指纹图谱质控方法,对所标定的共有峰进行了化学成分的归属,并作模糊聚类法分析和相似度评价,为市售樟芝产品的质量进行整体描述和评价。结果表明,不同批次菌粉间有较好的相似度,验证樟芝菌粉发酵工艺的稳定,所建立的指纹图谱可快速鉴别不同商品樟芝及灵芝,为樟芝菌粉的质量评价与品种鉴定提供全面的信息和检测标准。5、樟芝菌粉的质量标准化研究按《中国药典》规定方法检测樟芝菌粉的水分、总灰分、水溶性浸出物;用紫外可见分光光度法(UV-VIS)测定樟芝菌粉中总多糖、总三萜的含量;用高效液相色谱法(HPLC)测定其腺苷的含量。初步拟定了樟芝菌粉水分、总灰分、水溶性浸出物、多糖、三萜及腺苷的含量限度,可作为市售樟芝菌粉的质量控制标准。创新与特色:1、首次系统地对樟芝子实体进行生药鉴定研究,采用冰冻切片技术阐明了其组织构造特征,并对多糖类、三萜类化合物进行组织化学定位,确定其存在部位。2、首次建立UPLC-Q-TOF-MS和LC-QTRAP-MS同时测定樟芝菌粉中核苷类成分含量的方法,为樟芝菌粉市售产品的质量评价和控制提供可靠的检测方法。3、首次建立樟芝菌粉的UPLC-Q-TOF-MS提取离子流和HSGC-MS总离子流指纹图谱分析方法,科学评价樟芝菌粉批次间的稳定性和一致性。4、以多成分同时定量分析结合指纹图谱整体评价的模式,建立樟芝菌粉品质的科学评价体系,以实现对樟芝菌粉内在质量的综合评价和整体物质的全面控制。