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番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus),该病毒主要通过烟粉虱(Bemisiatabaci)传播。各地研究报道表明番茄黄化曲叶病毒病(tomato yellow leaf curl disease,TYLCD)已对我国各地的番茄生产造成严重危害。
本实验从山东省受番茄黄化曲叶病毒病危害的10个地区采集了10份番茄感病植株叶片样品。各地样品经DNA提取、PCR扩增、TA克隆、序列测定、序列同源性比对及系统进化分析等一系列分子实验方法检测,结果表明山东各地种植番茄所感染的番茄黄化曲叶病毒基因组DNA(DNA-A)为单链环状DNA分子,各地番茄黄化曲叶病毒分离物全长序列均包括2781个核苷酸,共编码6个开放式阅读框(ORF),各地序列间同源性在98.53%以上。系统进化树分析表明山东各地病毒分离物之间序列同源性虽然非常高,但是仍可以分为两个类群。将山东各地病毒分离物基因组全长序列在GeneBank上经nucleotide blast比对后分析发现与我国上海、江苏、安徽等地报道的番茄黄化曲叶病毒序列同源性在98.0%以上。系统进化树分析表明山东地区番茄黄化曲叶病毒分离物属于以色列番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-ISR)株系。
利用双生病毒卫星DNA特异性扩增引物,对山东各地所采集病毒分离物样品的卫星DNA(DNAβ)进行PCR扩增实验,结果表明山东各地番茄黄化曲叶病毒分离物均为单组份DNA,并不合有DNAβ。
搜集了4份已用于生产的抗番茄黄化曲叶病毒病番茄材料,利用已报道的分子标记技术,合成了3对特异性引物,分别对与抗番茄黄化曲叶病毒病相关的Ty-1,Ty-2和Ty-3基因进行了PCR扩增筛选,根据扩增出的不同特异性条带大小及数量,可快速鉴定番茄材料所具有的基因型(Ty-1/Ty-1,Ty-1/ty-1,ty-1/ty-1,Ty-2/Ty-2,Ty-2/ty-2,ty-2/ty-2,Ty-3/Ty-3,Ty-3/ty-3,ty-3/ty-3)。该检测方法简便、快捷,可作为一种快速鉴定筛选抗番茄黄化曲叶病毒病种质资源的分子实验方法。