载体携带小干扰RNA抑制人舌癌Tca8113细胞VEGF的表达以及肿瘤生长的体内外研究

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目的:了解载体携带的小干扰RNA·(small interfering RNA,siRNA)对人舌癌细胞株(tongue squamous carcinoma cell line,Tca8113)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的抑制作用以及对肿瘤细胞和移植瘤血管生成和生长的影响。方法:采用两对针对血管内皮生长因子的siRNA真核表达载体(PU-VEGF-siRNAl,PU-VEGF-siRNA2),以空载体组做实验对照组,经脂质体lipofectamine 2000转染Tca8113细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞株,未转染组做空白对照组。采用MTT检测转染后Tca8113细胞的增殖,流式细胞仪检测转染后Tca8113细胞的凋亡和细胞周期,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后VEGF mRNA表达情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,每组5只,接种后7天开始,每4天测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长情况,接种后47天处死,比较瘤体体积和瘤重。应用免疫组织化学方法检测裸鼠肿瘤组织VEGF的表达并评价肿瘤微血管密度,末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)定量检测裸鼠模型的肿瘤组织凋亡。结果:与实验对照组和空白对照组比较,转染PU-VEGF-siRNA载体后Tca8113细胞的增殖减缓,凋亡率增加,VEGF mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期结果显示,实验组S期改变与对照组细胞S期改变差异有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体内实验表明,与实验对照组和空白对照组相比较,2个实验组肿瘤生长速度降低,裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组瘤体体积、瘤重均无明显差异(P>0.05)。实验组VEGF表达和肿瘤微血管密度明显低于对照组(P<0.05)。实验组可见大量凋亡细胞,对照组仅见少许凋亡细胞,实验组凋亡指数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:载体携带的小干扰RNA能有效抑制舌癌细胞VEGF的表达,并能在体外抑制人舌癌Tca8113细胞以及体内移植瘤的生长以及血管生成。
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