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目的:本实验以小鼠为研究对象,通过测定围窗口期小鼠子宫内膜整合素β3和子宫内膜形态的表达,分析中药补肾增膜方对小鼠子宫内膜容受性的影响。
方法:将昆明健康雌性未孕小鼠分成5组,空白组(K组)组为生理盐水阴性对照组10例,模型组( M组) ( GnRHa+HMG+HCG )即GnRHa长周期促排卵方案;阳性对照组( Y组)为阿司匹林10例( GnRHa+HMG+HCG+阿司匹林);补肾增膜方中药低剂量实验组( D组) 10例( GnRHa+HMG+HCG+补肾增膜方低剂量) (中药相当于成人10倍的等效剂量 );补肾增膜方中药高剂量组( G组) 10例( GnRHa+HMG+HCG+补肾增膜方高剂量组) (中药相当于成人20倍的等效剂量)。将M、Y、D、 G4 组小鼠于动情周期第3天开始,每日上午9时腹腔内注射阿拉瑞林40μ g/100g 1 次/d ,连用9天;空白组组小鼠也于动情周期第3天开始,每日上午9时腹腔内注射生理盐水 0.2 ml 1 次/d ,连用9天。于造模的同时给予小鼠灌胃,空白组每日灌胃生理盐水 20ml/kg · d , Bid ,连续灌胃11天;模型组每日灌胃生理盐水 20ml/kg · d , Bid ,连续灌胃11天;阳性对照组每日灌胃阿司匹林 0.75ml/35g · d , Bid ,连续灌胃11天;补肾增膜方低剂量方组每日灌胃补肾增膜方低剂量(相当于成人等效剂量的10倍), Bid ,连续灌胃11天;补肾增膜方高剂量方组 每日灌胃补肾增膜方高剂量(相当于成人等效剂量的20倍), Bid ,连续灌胃11天;M、Y、D、G小鼠均于第9天腹腔内注射阿拉瑞林同时于下午6时加用HMG 40u/100g 1次;K组小鼠于第9天腹腔内注射生理盐水的同时于下午6时加用生理盐水 0.2 ml 腹腔注射 1次;注射HMG48 h后于下午6时给M、Y、D、G小鼠腹腔内注射HCG 100u/100g 1次;K组小鼠生理盐水0.2 ml 腹腔注射 1次。HCG 48 h后观察小鼠阴道,大量角化细胞出现说明造模成功。注射HCG 48 h后第二天10时,用颈椎脱臼法处死各组小鼠,剖腹取出子宫,剔除周围黏膜组织,将子宫上段、中段组织样本分别保存置于无菌小瓶中用备用,无菌小瓶中放入 4% 多聚甲醛溶液对标本进行固定。使用 SP 免疫组化试验法测定整合素β3 ,用 HE 染色法子宫内膜形态。
结果: 1. 在整合素的表达上空白组与中药低剂量组比较, P=0.011 ( P<0.05 ) ,有统计学差异;模型组与阳性对照组比较, P=0.029 ( P<0.05 ),有统计学差异;模型组与中药低剂量组比较, P=0.001 ( P<0.05 ),有统计学差异;模型组与中药高剂量组比较, P=0.009 ( P<0.05 ),有统计学差异;阳性对照组与中药低剂量组比较, P=0.443 ,无统计学意义;阳性对照组与中药高剂量组比较, P=1.000 ,无统计学意义;中药高剂量组与中药低剂量组比较, P=0.666 ,无统计学意义。
2. 在子宫内膜形态学的研究中,空白组、模型组、阳性对照组、中药高剂量组、中药低剂量组小鼠着床期子宫内膜成熟度比较,模型组与阳性对照组、模型组与中药低剂量组比较, P=0.020 , P=0.020 ( P<0.05 ) ,有统计学差异。腺体面积的比较显示模型组与中药低剂量组比较, t=3.9491 , P=0.0009 ( P
<0.05 ) ,有统计学差异。腺腔面积的比较显示:空白组与中药低剂量组比较, t=2.6277 , P=0.0171 ( P<0.05 ) ,有统计学差异;模型组与阳性对照组比较, t=3.0103 , P=0.0075 ( P<0.05 ) ,有统计学差异;模型组与中药低剂量组比较, t=5.7298 , P=0.0000 ( P<0.05 ) ,有统计学差异;模型组与中药高剂量组比较, t=3.8586,P=0.0001 ( P<0.05 ) ,有统计学差异。
结论:1.补肾增膜方和阿司匹林均可以提高控制性超排卵小鼠种植窗期子宫内膜整合素β3蛋白和子宫内膜形态的表达水平,在一定程度上改善超排卵小鼠的子宫内膜容受性。
2.补肾增膜方改善超排卵小鼠子宫内膜容受性的效果较阿司匹林无明显差异。