【摘 要】
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肉鸡的肌肉生长受到营养水平、遗传因素、环境条件等众多因素的调控。大量研究表明,microRNA(miRNA)在细胞周期及个体生长发育过程等方面发挥着不可或缺的调控作用,miRNAs对
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肉鸡的肌肉生长受到营养水平、遗传因素、环境条件等众多因素的调控。大量研究表明,microRNA(miRNA)在细胞周期及个体生长发育过程等方面发挥着不可或缺的调控作用,miRNAs对家鸡的肌肉生长也有着重要的影响。此研究在本课题组前期RNA测序结果的基础上,通过筛查并选取出在杏花鸡与隐性白羽洛克鸡间差异表达的gga-miR-34b-5p和基因IGFBP2(胰岛素样生长因子结合蛋白)作为候选研究对象,验证gga-miR-34b-5p和IGFBP2基因之间的靶标关系,并进一步探讨gga-miR-34b-5p通过靶向IGFBP2基因调控成肌细胞增殖的过程,从而对家鸡肌肉生长的影响机制。研究结果如下:(1)通过双荧光素酶报告系统和体外过表达的方法,验证miR-34b-5p与靶基因IGFBP2之间的靶标关系。构建靶基因pmirGLO-IGFBP2野生型载体和pmirGLO-IGFBP2突变型载体,并转染到DF-1细胞中,测定萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的荧光信号,将结果与pmirGLO空质粒载体转染后测定的萤火虫:海肾荧光相对活性进行对照,表明miR-34b-5p和IGFBP2基因有确切的靶标关系。(2)在DF-1细胞中进行miR-34b-5p体外过表达实验,发现miR-34b-5p过表达使IGFBP2的mRNA表达量下调,说明miR-34b-5p对IGFBP2基因具有抑制作用。(3)通过流式细胞术检测细胞周期和EdU(5-Ethynyl-2′-Deoxyuridine(EdU))增殖实验探索miR-34b-5p对鸡成肌细胞增殖的影响,结果显示miR-34b-5p靶向调控IGFBP2基因抑制鸡成肌细胞增殖。(4)通过IGFBP2基因3′端序列SNP位点筛查及个别SNP位点与生长性状关联分析,结果发现,有2个SNP位点分别与胸肉重、胸深具有显著相关性(P<0.05),表明IGFBP2基因在鸡胸肌组织的生长中发挥重要作用。综上所述,gga-miR-34b-5p通过靶向IGFBP2基因,调控成肌细胞的增殖,从而影响家鸡肌肉的生长。
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