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目的：通过建立慢性疲劳大鼠模型,观察龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠一般情况以及行为学指标(旷场实验、力竭游泳时间)的影响,测定慢性疲劳大鼠海马5-HT和5-HT1A受体的表达,观察龟鹿益神颗粒对慢性疲劳大鼠海马5-HT和5-HT1A受体表达的影响,进一步探讨其作用机制,为临床应用龟鹿益神颗粒治疗CFS提供实验依据和理论支持。 方法：雄性SPF级SD大鼠40只,体重200±20克,适应性饲养一周。采用随机对照的方法,随机抽取10只作为正常组,其余30只大鼠随机分为3组,每组10只,分别为模型对照组、苁蓉益肾颗粒对照组、龟鹿益神颗粒治疗组。采用强制冷水游泳,束缚和夹尾复合为慢性疲劳因素,构建慢性疲劳大鼠模型。正常组给予普通饲养,模型对照组、苁蓉益肾颗粒对照组、龟鹿益神颗粒治疗组给予上述复合因素进行造模。造模14天后,各组造模大鼠出现体重减轻,饮水量、进食量均减少、时有便溏,鼠毛失去光泽等,证实慢性疲劳大鼠模型造模成功。然后给予各组大鼠灌胃,正常对照组按照1ml/100g给予生理盐水灌胃；苁蓉益肾颗粒对照组按照417mg/kg∙d给予苁蓉益肾颗粒混悬液灌胃；龟鹿益神颗粒治疗组按照1250mg/kg∙d给予龟鹿益神颗粒混悬液灌胃,模型对照组按照1ml/100g给予生理盐水灌胃。各组大鼠给药均1次/d,连续给药14天。造模前一天、造模结束后及末次给药后各测一次体重、力竭游泳时间及直立运动次数和跨格运动次数。上述实验结束后,打开胸腔,由心尖插入灌注针头,经升主动脉行4%多聚甲醛PB缓冲液固定。先给予100ml~200ml生理盐水灌注,后给予100ml~200ml 4%多聚甲醛PB缓冲液灌注固定脑组织,先快后慢,时间大约 40~60分钟。灌注完成后,大鼠快速断头,冰面上打开颅腔取出大脑组织,除去软脑膜,放入4%多聚甲醛PB缓冲液中固定,用SABC免疫组织化学法检测海马5-羟色胺(5-HT)、5-羟色胺1A(5-HT1A)受体的表达,应用图像采集系统采集图像,以细胞浆中黄色颗粒为5-HT和5-HT1A受体的阳性表达,以阳性表达区域的平均光密度值表示其表达强度。 采用IBM SPSS19.0统计软件进行处理,所有数据均采用均数±标准差表示,组间差异采用单因素方差分析(ANOVA)：方差齐时采用LSD法(最小显著差异法)；方差不齐时采用Dunnett’s T3法,以P<0.05作为显著性差异的标准。 结果：(1)造模后,各组造模大鼠体重增长缓慢,进食量减少,皮毛色泽发暗,活动减少。正常组大鼠体重正常增长,皮毛色泽明亮,活动正常。与正常组相比,苁蓉益肾颗粒对照组、龟鹿益神颗粒治疗组、模型对照组大鼠进食量减少、鼠毛颜色发暗,体重减轻,跨格运动、直立运动次数减少,力竭游泳时间变短,有显著性差异(P<0.05)。灌胃给药结束后,与正常组相比,苁蓉益肾颗粒对照组、龟鹿益神颗粒治疗组体重,跨格运动、直立运动次数等无显著性差异(P>0.05)。与模型对照组相比,苁蓉益肾颗粒对照组、龟鹿益神颗粒治疗组体重,跨格运动、直立运动次数明显增加,力竭游泳时间明显延长,有显著性差异(P<0.05)。龟鹿益神颗粒治疗组与苁蓉益肾颗粒对照组相比较,无显著性差异(P>0.05)。 (2)与正常组相比,模型对照组、龟鹿益神颗粒治疗组和苁蓉益肾颗粒对照组大鼠海马5-HT及5-HT1A 受体阳性表达水平明显下降,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,龟鹿益神颗粒治疗组、苁蓉益肾颗粒对照组海马5-HT 和5-HT1A受体阳性表达水平明显增高,有显著性差异(P<0.05)。龟鹿益神颗粒治疗组海马5-HT 和5-HT1A受体阳性表达水平明显高于苁蓉益肾颗粒对照组,有显著性差异(P<0.05)。 结论：(1)本实验采用冷水游泳、束缚和夹尾复合为刺激因素,构建慢性疲劳大鼠模型,操作性强,类似人体的疲劳发病的内外环境,更能准确复制出人体的慢性疲劳状态。 (2)龟鹿益神颗粒可以提高慢性疲劳大鼠直立运动次数和跨格运动次数,延长慢性疲劳大鼠力竭游泳时间,改善慢性疲劳大鼠心理和身体的疲劳状态,为龟鹿益神颗粒的临床应用提供了实验依据。 (3)研究表明,慢性疲劳大鼠海马5-HT 和5-HT1A受体阳性表达水平较正常对照组明显下降,龟鹿益神颗粒治疗组海马5-HT 和5-HT1A受体阳性表达水平明显增高。提示龟鹿益神颗粒可调控中枢神经递质5-HT和5-HT1A受体的分泌及表达,进一步阐释了龟鹿益神颗粒治疗慢性疲劳综合征的作用机制。