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目的:探讨去泛素化酶BRCC36在小鼠心肌梗死后心肌细胞DNA损伤修复及心肌重构中的作用及其作用机制。方法:1)通过商业化服务构建心肌细胞特异性过表达BRCC36的转基因小鼠(α-MHC-BRCC36),利用PCR、Western blot方法进行鉴定并筛选心肌细胞特异性过表达BRCC36的阳性转基因小鼠。2)取8-10周上述转基因小鼠,采用结扎小鼠心脏左冠状动脉前降支(Left anterior coronary artery,LAD)的方法构建心肌梗死模型,同时取8-10周野生型C57小鼠作为对照组。实验分组:野生假手术组(WTSham,n=15)、野生手术组(WTMI,n=47)、转基因假手术组(TGSham,n=15)、转基因手术组(TGMI,n=29)。3)心肌梗死模型构建成功后继续饲养4周,统计每组小鼠存活率;通过超声心动图检测小鼠心脏功能;通过TTC染色检测小鼠心脏梗死范围。4)通过TUNEL染色方法检测心肌细胞凋亡比例,并通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白的表达情况。5)采用实时定量PCR(Real-time PCR)的方法检测细胞外基质中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)及骨膜蛋白(Periostin)的表达情况,并通过天狼猩红染色、Masson三色法染色检测LAD术后心肌纤维化的情况,通过Western blot方法检测TGFβ信号通路中Smad3磷酸化情况及细胞外基质中collage-Ⅲ的表达情况。6)通过Western blot检测LAD术后DNA损伤标志物γH2AX及DNA修复因子RAD51蛋白的变化情况。结果:1)通过PCR方法对转基因小鼠基因型进行鉴定,筛选阳性小鼠,并通过Westernblot的方法检测蛋白水平表达情况发现,基础状态下转基因小鼠心脏中BRCC36蛋白表达明显增高。2)结扎小鼠左冠状动脉前降支,观察小鼠心电图,发现ST段显著抬高。LAD术后28天,统计每组小鼠存活率发现,与野生手术组小鼠相比,转基因手术组小鼠存活率明显增高(53.19%vs 79.31%)。通过TTC染色检测小鼠LAD术后心肌缺血面积,发现与野生型手术组相比,转基因手术组小鼠心肌缺血面积明显减少。3)通过超声心动图检测小鼠LAD术后心脏功能,结果显示:与假手术组相比,手术组小鼠心脏左心室收缩末期内径(Left ventricular internaldimension systole,LVIDs)、左心室舒张末期内径(Left ventrcular internal diameter diastole,LVIDd)明显增加,左心室射血分数(left ventricular ejcction fraction,LVEF)、短轴缩短率(shortening fraction,FS%)明显降低,心脏功能明显降低。与野生型手术组相比,转基因手术组小鼠的心脏功能明显改善。观察每组小鼠LAD术后28天心脏大小,发现野生型手术组小鼠心脏比转基因手术组小鼠心脏明显增大。计算小鼠心脏体重比值发现,野生型手术组小鼠的指标比转基因手术组小鼠明显增大。4)通过天狼猩红染色和masson三色法染色,检测小鼠LAD术后小鼠心肌纤维化的情况,发现手术组小鼠心肌纤维化明显加重,与野生型小鼠相比,转基因手术组小鼠心肌纤维化明显降低。通过实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)方法检测细胞外基质中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨膜蛋白(Periostin)的表达,发现LAD术后小鼠细胞外基质分子CTGF、Periostin的表达明显增高,而转基因手术组小鼠细胞外基质的表达明显低于野生型小鼠。Western blot检测细胞外基质中胶原蛋白-Ⅲ(collage-Ⅲ)表达发现,转基因手术小鼠中collage-ⅢⅢ的表达明显低于野生手术组,且P-Srmad3的表达也明显低于野生手术组。5)通过TUNEL染色法检测小鼠LAD术后心肌细胞凋亡的比例,结果显示,LAD术后小鼠心肌细胞凋亡比例明显增加,而与野生型手术组相比,转基因手术组小鼠心肌细胞凋亡比例明显低于野生型小鼠手术组。Western blot检测凋亡蛋白发现,LAD术后抗凋亡蛋白Bcl-2、P-Bad、Mcl-1的表达明显降低,促凋亡蛋白Puma、caspase-3的表达明显增高,而转基因手术组小鼠抗凋亡蛋白的表达明显高于野生型手术组小鼠,促凋亡蛋白的表达明显低于野生型转基因小鼠。6)为了检测BRCC36对小鼠LAD术后心肌细胞DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)的影响,通过Western blot的方法检测DNA损伤标志物γH2AX及DNA损伤修复因子RAD51的表达情况,结果发现,LAD术后小鼠心肌细胞DNA损伤标志物γH2AX的表达明显增高,DNA损伤修复因子RAD51的表达明显降低,而与野生型手术组相比,转基因手术组小鼠DNA损伤标志物γH2AX的表达明显降低,而DNA损伤修复因子RAD51的表达明显增高。结论:心肌细胞特异性过表达BRCC36可显著改善心肌梗死后心脏病理性重构,改善心脏功能,这可能与其降低TGFβ诱导的Smad3磷酸化及促进DNA损伤修复有关。