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番木瓜(CaricapapayaL.)是一种药食兼用的热带草本果树,从番木瓜植株中分离的内生真菌可能产生与宿主植物相同或相似结构的生物活性成分。筛选番木瓜内生真菌中的活性菌株,并分析其活性成分和作用,对开发具有潜在应用价值的植物内生真菌资源具有重要意义。本试验采用组织分离法对番木瓜植株茎、叶、果等不同部位的内生真菌进行分离,利用微生物形态学特征观察和内转录间隔区序列(ITS)分析鉴定内生真菌菌株种属,并构建菌株的系统发育树,进一步确定其种属分类地位。利用DPPH和ABTS自由基清除法等体外抗氧化能力测定方法,筛选具有良好抗氧化活性的内生真菌菌株。并以化学显色法、薄层层析法(TLC)、紫外光谱法(UV)进行抗氧化活性成分中黄酮类物质的检识。采用平板对峙法筛选具有抗菌活性的菌株。以抗菌试验筛选所得对番木瓜炭疽病具有抗菌活性的菌株和番木瓜果实为材料。进一步分析抗菌活性菌株对番木瓜果实炭疽病的防治效果,及其对果实抗氧化酶系统、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)的影响,初步研究其对炭疽病的防治机理。得到主要研究成果如下:(1)番木瓜内生真菌的分离鉴定:总计分离得到]31株内生真菌,其中31株来自于茎,45株来自于叶、55株来自于果实。形态学观察结合分子鉴定结果显示,131株分离所得番木瓜内生真菌分别归类于曲霉属(Aspergillus)、踝节菌属(Talaromyces)、假丝酵母属(Candida)、枝孢霉属(Cladosporium)、青霉属(Penicillium)、镰刀菌属(Fusarium)、茎点霉属(Phoma)、叶点霉属(Phylloslicta)、木霉属(Trichoderma)、刺盘孢属(Colletotrichum)、腐皮壳属(Diaporthe)、单胞瓶霉属(Phialemonium)、等20个属。其中曲霉属内生真菌(Aspergillus)和刺盘孢属(Colletotrichum)为番木瓜内生真菌中的优势类群,相对分离频率分别为47.33%和14.50%,其余各属均小于10%。(2)番木瓜内生真菌抗氧化活性菌株的筛选与成分检识:以100μg/mL内生真菌的乙酸乙酯提取物为初筛选浓度,筛选获得7株在该浓度下ABTS和DPPH自由基清除率大于50%,具有较高抗氧化活性的菌株。其中菌株Y17(Penicillium rolfsii)表现出较好的抗氧化活性,对两种自由基IC50值均小于20μg/mL。表明番木瓜内生真菌中存在具有抗氧化活性的菌株,并有作为抗氧化剂开发利用的潜力。在抗氧化成分的检识中发现菌株G41(Penicillium citrinum)对5种黄酮类物质显色反应均显阳性,TLC法表明其含有与槲皮素相同或相似的黄酮类物质,UV检测光谱表明符合黄酮类物质的UV光谱特征。说明番木瓜内生真菌中含有产黄酮类物质的内生真菌。(3)番木瓜内生真菌抗菌活性菌株的筛选与生防效果:以胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeosp)等5种常见的植物病原真菌作为指示菌,筛选获得13株至少对一种供试病原真菌表现出抑菌活性的菌株。其中菌株Y17(Penicillium rolfsii)对番木瓜炭疽病病原菌(Colletotrichum gloeosp)表现出抑菌效果,且抑菌谱相对其他菌株更广。进一步探究抗菌活性菌株Y17对番木瓜果实炭疽病的防治效果,结果表明菌株Y17发酵液处理果实后,有效抑制了病斑扩展。与对照组果实相比,菌株Y17处理后果实CAT、POD、SOD等酶活性均有不同程度上的提高。果实的丙二醛含量显著降低,总抗氧化能力有所提高。说明菌株Y17处理可能通过诱导果实中CAT、POD、SOD等抗氧化防御酶的活性升高,减少番木瓜果实中MDA积累,诱导总抗氧化能力提高,从而增强番木瓜果实对炭疽病菌侵染的抗性。