茄枝中多糖提取及其生物活性研究

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茄子,是茄科茄属一年生草本植物,热带为多年生,具有清热止血,消肿止痛,药用热毒痈疮,皮肤溃疡,便血,治疗冻疮,降低高血脂,高血压,防治胃病等多方面功效,果实食用部分占93%,而对茄枝(茄梗)的生物活性功能还禾见报道,通过多方面的资料分析,植物的根茎中含有多糖成分,以此作为研究的依据。本文以传统水提醇沉为提取方法,研究茄枝多糖的提取工艺,分离纯化技术,并对得到的茄枝多糖进行了理化性质,体外和体内抗氧化作用及免疫调节活性研究,以期为茄枝多糖开发应用奠定基础。通过单因素与正交试验,确定茄枝多糖最佳提取工艺条件,用95%乙醇进行醇沉操作,最终确定当料液比为1:80,提取次数为1次,提取温度为70℃,提取时间为2.5h时茄枝多糖得率最高,此时茄枝多糖的得率为2.87%。其中影响多糖得率的因素的主次顺序为料液比>次数>提取温度>提取时间。料液比,提取时间,提取温度对提取的多糖得率有显著性影响,对提取工艺起主要影响作用。利用三氯乙酸法,Sevag法,木瓜蛋白酶酶解法,酶解法与三氯乙酸法结合,酶解法与Sevag法相结合的四种方法分别进行除蛋白实验,以蛋白的清除率与多糖的损失率为评价指标,优选最佳方法。结果表明不同的脱蛋白方法随着处理次数的增加能够提高蛋白脱除率,但是会伴随着大量多糖的损失。与酶法结合后,可以很好的提高蛋白脱除效果,同时减少多糖的损失率。三氯乙酸法和Sevag法分别于木瓜蛋白酶法结合后除蛋白效果都由于单独使用,以酶解法与三氯乙酸法相结合的蛋白清除率为60.5%,多糖损失率为57.8%,与其它三种方法相比,效果相对较好。将脱蛋白后的茄枝多糖用DEAE-D22纤维素分离,得到三个组分ESP1-1,ESP1-2,ESP1-3,其中 ESP1-1 为最大洗脱峰,通过 SephadexG-100 凝胶柱层析进行分离,得到成分相对单一的纯多糖。茄枝多糖ESP1-1的理化性质结果表明,茄枝多糖是呈现淡黄色粉末状,在水中极易溶解,不溶于有机试剂,苯酚-硫酸法呈橙色,Fehling反应有红色沉淀,溶液呈绿色,表明含有游离单糖。Molish反应有紫色环生成,证明还有氨基糖苷类糖,碘-碘化钾反应呈蓝色,说明不含淀粉,三氯化铁反应有沉淀,说明不含有酚类物质,紫外280nm处有吸收峰,说明经过纯化的茄枝多糖仍然有蛋白质存在,这可能是因为还存在与多糖结合的糖蛋白。薄层层析结果显示茄枝多糖ESP1-1含有甘露糖、葡萄糖、果糖,高效液相色谱法分析显示除上述单糖外,还有木糖组分。体外抗氧化实验表明,精制茄枝多糖ESP1-1对超氧阴离子和羟基自由基都有清除能力,且其清除能力随着茄枝多糖ESP1-1浓度的增加而增加,经过小鼠体内实验可知,ESP1-1可增加体内的SOD含量,降低体内所产生的MDA含量,与模型组相比较具有显著性抗氧化作用。茄枝多糖ESP1-1对小鼠脾淋巴细胞增殖能力影响的实验结果显示,茄枝多糖具有提高小鼠免疫功能的作用,且提高效果与模型组比较差异显著。
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