TN17/Treg细胞平衡失调与胃癌进展关系的研究

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目的:检测Th17和Treg细胞在胃癌患者中的表达情况,探讨Th17/Treg免疫平衡失调与胃癌临床病理进展之间的关系,为开展有效的胃癌免疫细胞治疗新策略提供实验和理论依据。  方法:  1收集45例胃癌患者和20例健康体检者外周血,分离单个核细胞(PBMC),采用流式细胞分析术检测Th17和Treg细胞比例,分析胃癌患者Th17和Treg细胞分布与临床病理特征之间的关系。  2采用免疫组织化学染色法,检测胃癌组织与非癌对照组织、肿瘤区域引流淋巴结与非肿瘤区域淋巴结中CD4+/IL-17+T细胞和CD4+/FoxP3+T细胞的表达和定位,探讨Th17和Treg细胞在胃癌组织中的定位表达。  3采用荧光定量RT-PCR法,检测胃癌组织与非癌对照组织、肿瘤区域引流淋巴结与非肿瘤区域淋巴结中RORc、IL-17、IL-23、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-1β、IL一6、Foxp3、IL-10mRNA表达,探讨胃癌组织中Th17和Treg细胞免疫平衡与其功能的关系及其分化调节机制。  结果:  1流式细胞分析结果显示,与健康对照组相比,胃癌患者外周血中,Th17细胞比例显著增多(1.63±0.10%vs6.67±0.77%,P<0.01),并与患者的临床分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.017)有关,与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、侵润深度、血管侵袭、脉管瘤栓、胃癌相关肿瘤抗原无关(P>0.05);Treg细胞比例明显增加(10.34±1.13%vs4.79±0.18%,P<0.01),并与患者的临床分期(P=0.034)、肿瘤分化程度(P=0.015)有关,与患者的性别、年龄、肿瘤大小、侵润深度、淋巴结转移、血管侵袭、脉管瘤栓、胃癌相关肿瘤抗原(CA50、CA199、CA724、CEA)无关(P>0.05);Th17/Treg细胞比例明显增加(0.65±0.05vs0.34±0.03,P<0.01),并与患者淋巴结转移有关(P=0.036),与患者的性别、年龄、临床分期、肿瘤分化程度、肿瘤大小、侵润深度、血管侵袭、脉管瘤栓、胃癌相关肿瘤抗原无关(P>0.05)。采用Pearson相关分析显示,健康人外周血中Th17和Treg细胞分布呈正相关(R=0.64,P=0.003),但在胃癌患者中两者无相关性(R=0.12,P=0.49)。  2免疫组织化学染色结果显示,胃癌组织和胃癌区域引流淋巴结内可见大量CD4+/IL-17+T细胞和CD4+/Foxp3+T细胞聚集,而在非癌对照组织和腹腔正常淋巴结内未见或极少见CD4+/IL-17+T细胞和CD4+/Foxp3+T细胞。  3 Real-time RT-PCR分析结果显示,与非癌对照组织相比,胃癌组织内RORc、IL-17、IL-21、TGF-β、IL-6、Foxp3、IL-10 mRNA表达水平明显增高(P<0.05);与腹腔正常淋巴结相比,胃癌区域引流淋巴结内RORc、IL-17、IL-23、IL-21、TGF-β、IL-1β、IL-6、Foxp3、IL-10 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而IL-22mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。胃癌组织内RORc mRNA表达水平与IL-17、IL-21,TGF-β,IL-1β mRNA表达水平明显相关;Foxp3 mRNA表达水平与TGF-β mRNA表达水平有明显相关(P<0.05)。胃癌区域引流淋巴结中RORc mRNA表达水平与IL-17、IL-21、TGF-β、IL-1β、IL-6mRNA表达水平明显相关;Foxp3 mRNA表达水平与IL-10、TGF-β mRNA表达水平明显相关(P<0.05)。  4 RORc和Foxp3mRNA表达水平关联性分析显示,胃癌组织和区域引流淋巴结中RORc和Foxp3mRNA表达水平均无明显相关性(P>0.05)。  5 RORc和Foxp3mRNA表达水平与胃癌患者TNM分期有关(P=0.008,P=0.032),与其他临床指标无关(P>0.05)。  结论:  1胃癌患者Th17、Treg细胞及Th17/Treg细胞比值明显增高,并与患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关,提示胃癌患者存在Th17/Treg细胞免疫平衡失调,这种失调可能促进了胃癌的进展,并影响患者预后。  2胃癌组织内Th17细胞的聚集可能与肿瘤微环境中TGF-β、IL-6促进其分化有关,增多的Th17细胞通过分泌IL-17和IL-21促进肿瘤进展;Treg细胞通过分泌TGF-β,使肿瘤细胞逃逸机体免疫监视促进肿瘤进展,高水平TGF-β对Treg细胞的分化发挥正反馈调节作用。
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