目的　　探讨miR-502-5p在乳腺癌组织及细胞中的表达，以及对乳腺癌细胞早期凋亡和增殖能力的影响，并分析其作用机制。　　材料与方法　　1、主要材料　　组织标本:收集2010年1月至2012年7月中国医科大学附属第一医院30例新鲜乳腺癌及癌旁正常乳腺组织标本，保存于-80℃冰箱中。所有标本均经病理科检查确诊，并经中国医科大学附属第一医院医学伦理委员会批准及患者知情同意。　　细胞系:人正常乳腺细胞系MCF-10A(ATCC)，人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231(ATCC)，人胚肾细胞系HEK293（上海细胞生物研究所）。　　主要抗体:TRAF2抗体（美国BD公司）。　　2、细胞培养　　HEK293和MCF-7细胞在含有10％胎牛血清的DMEM培养基，MDA-MB-231细胞在含有10％胎牛血清的L15培养基，MCF-10A细胞在含有5％马血清的DMEM/F12(1∶1)培养基，37℃，5％CO2孵箱孵育。　　3、瞬时转染　　转染前一天铺6孔板，待细胞密度约为60-80％时进行转染，把smallRNAs、siRNA或质粒及转染试剂分别混于双无培养基，静置5min后，将二者混合静置20min;PBS清洗六孔板中的细胞，并加入无抗培养基;把混合后液体均匀滴入六孔板中，放入培养箱孵育;48h后收集细胞提取RNA和蛋白，以及做相关功能学检测。　　4、qRT-PCR　　根据制造商说明书使用Trizol提取组织标本和细胞系总RNA，使用miRcutemiRNA分离试剂盒提取微小RNA，然后测定260/280nmOD值。应用ABI7500实时定量PCR系统检测miR-502-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达。应用一步法PrimeScriptmiRNA的cDNA合成试剂盒和SYBR(@)预混料前的TaqTMⅡ进行反转录和定量PCR。U6(小核RNA)的表达作为内参。　　5、流式双染检测凋亡　　转染smallRNAs、siRNA或质粒48h后，按照QIAGEN凋亡试剂盒说明双染细胞，上流式仪检测凋亡。　　6、MTT实验　　转染smallRNAs、siRNA或质粒24h后，细胞计数（4000-8000个/孔）转入96孔板，按照QIAGENMTT试剂盒说明避光加入MTT100ul/孔，37℃孵育4小时后弃上清加入150ulDMSO/孔，振荡15min，上机检测，绘制曲线。　　7、集落形成　　转染smallRNAs、siRNA或质粒24h后，细胞计数（3000-5000个/皿）转入6cm皿子中，于孵育箱培养3-4周，PBS浸洗，95％乙醇固定20min，风干，0.1％结晶紫染色10min，自来水冲洗，空气干燥，计算集落形成情况。　　8、Westernblot　　应用蛋白提取试剂盒提取转染48h后细胞蛋白，并用BCA蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度。10％SDS-PAGE电泳，20％甲醇转印(60V,2h)，缓冲液洗膜5min×3;5％脱脂奶粉封闭2h，缓冲液洗膜5min×3;与TRAF2一抗(1∶200)4℃孵育过夜，缓冲液洗膜10min×3;与碱性磷酸酶标记二抗(1∶1000)室温下孵育2h，缓冲液洗膜10min×3;ECL显色。β-肌动蛋白和GAPDH作为内参，过程同上。　　9、荧光素酶报告基因　　将野生型pGL3-TRAF2-3UTR(wt-pGL3-TRAF2-3UTR)或突变型pGL3-TRAF2-3UTR(mut-pGL3-TRAF2-3UTR)质粒分别与miRNA-502-5pmimicormimicNC共转染至HEK293和MCF-7细胞中，pRL-TK作为内对照，24h后收集细胞，按照Promega双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双荧光素酶活性。　　10、统计分析　　使用SPSS17.0统计软件，通过独立样本t检验和单因素方差分析(ANOVA)进行统计学分析，以P＜0.05具有统计学意义。　　结果　　1、miR-502-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达　　2、miR-502-5p促进乳腺癌细胞早期凋亡和抑制乳腺癌细胞增殖　　3、TRAF2是miR-502-5p直接靶基因　　4、miR-502-5p通过TRAF2调控乳腺癌细胞早期凋亡与增殖　　结论　　miR-502-5p通过TRAF2调控乳腺癌细胞早期凋亡与增殖而发挥抑癌作用。