目的：探讨 MTX对映体耐药细胞的体外运动能力、浸润侵袭能力以及肿瘤血管相关因子VEGF及其受体表达差异，从而说明MTX对映体在肿瘤细胞耐药后的侵袭转移过程中的差异。　　方法：①采用浓度递增结合低剂量持续诱导，获得耐受15μmol/L MTX对映体的细胞系,分别命名为 L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549；②MTT方法检测D-(-)-MTX/A549和 L-(+)-MTX/A549细胞的增值；③通过平板划痕实验反映D-(-)-MTX/A549和L-(+)-MTX/A549细胞移动能力；④采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组细胞的克隆形成率和集落形成的大小；⑤皮下接种裸鼠，成瘤后取瘤体切片，进行 CD34组化染色，MVD计数；⑥应用Transwell小室检测三组细胞体外运动和侵袭能力；⑦采用荧光定量PCR技术分别检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组中VEGF、VEGFR-1和VEGFR-2 mRNA的表达水平。　　结果：①MTT实验发现D-(-)-MTX/A549细胞耐药指数是（20.30±1.83），为高度耐药，而 L-(+)-MTX/A549细胞的耐药指数是（6.10±0.95），为中度耐药。②72小时后L-(+)-MTX/A549细胞进入划痕区的数量少于D-(-)-MTX/A549细胞。③软琼脂实验发现D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组细胞的集落数以及形成率无明显差异（P>0.05），而D-(-)-MTX/A549组细胞的集落形状大小明显大于L-(+)-MTX/A549细胞。④三种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计MVD，亲本细胞为（3.29±1.11），L-(+)-MTX/A549细胞为（8.00±2.14）， D-(-)-MTX/A549细胞为（57.88±13.87）。⑤Transwell小室检测D-(-)-MTX/A549、L-(+)-MTX/A549以及亲本细胞的体外运动能力，它们的穿过小室的细胞数分别为（1224.33±76.37）、（876.33±41.40）、（785±76.05），而检测三种细胞浸润侵袭穿过人工基底膜 Matrigel的细胞数分别为（267±30.12）、（106.33±16.50）、（134.33±16.26）。⑥荧光定量PCR检测，D-(-)-MTX/A549组VEGF、VEGFR-1、VEGFR–2Ct值/β-Actin的Ct值分别为（1.668±0.127）、（1.872±0.133）、（1.919±0.107），L-(+)-MTX/A549组比值分别为（2.035±0.185）、（2.221±0.157）、（2.255±0.140），亲本细胞组比值为（2.057±0.123）、（2.291±0.138）、（2.354±0.131）。④⑤⑥三组实验的数据均显示 D-(-)-MTX/A549组和L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组均有显著差异（P<0.05），而L-(+)-MTX/A549组与亲本细胞组无显著差异(P>0.05)。　　结论：D-(-)-MTX诱导的非小细胞肺癌A549耐药细胞在体外运动、浸润侵袭、肿瘤血管形成方面的能力均大于L-(+)-MTX耐药细胞，从而说明MTX对映体耐药细胞后细胞的转移力有差异。