研究背景三七属五加科多年生草本植物，又称为田七，是我国的传统中药材之一，被明代著名药学家李时珍称为“金不换”。因其有降血压、扩血管、改善微循环、抗炎、调节机体免疫功能、活血化瘀等功效而被普遍用于治疗心脑血管疾病及免疫力低下等多种疾病。三七素（dencichine）是三七中的主要止血活性成分，但人畜在长期食用含三七素的豆科山黧豆属植物后出现不可逆转的运动功能失调及神经元进行性变性坏死，对上述现象的研究发现，三七素作为一种兴奋性氨基酸具有神经毒作用。三七素的药用价值及其神经毒性作用的矛盾使其成为广大科研工作者的研究热点。三七素是一种兴奋性氨基酸类似物，其具有两种分子结构体，包括L-BOAA和D-BOAA，研究表明具有神经毒性的主要是L-BOAA，通过作用于非NMDA受体产生其神经毒性作用，但是D-BOAA却不会产生神经毒性效应。由于谷氨酸及其受体在中枢神经系统中具有重要的生理及病理作用，是脑缺血缺氧损伤、癫痫、痴呆等多种神经系统疾病导致脑损伤的重要发病机制，但研究又发现低剂量谷氨酸预处理可增强动物对上述疾病的耐受力。那么小剂量三七素预处理是否也会像谷氨酸一样产生一定的神经保护作用呢？从这一角度出发我们拟对低剂量三七素预处理对神经系统损伤的作用进行初步探索。选取具有神经元特性的PC12细胞为研究对象，研究三七素预处理对多种损伤因素导致的PC12细胞损伤的影响，初步探讨低剂量三七素对PC12细胞的作用及其可能机制。实验一不同浓度三七素对PC12细胞的影响目的：研究不同浓度的三七素对PC12细胞生长状态的影响。方法：用DMEM+10%FBS细胞培养液复苏、传代PC12细胞，在细胞生长状态旺盛时进行实验。接种48小时后每组细胞中加入不同终浓度的三七素，96小时后进行细胞形态学观察且用MTT法评估细胞活性。结果：三七素作用48小时后，与正常对照组相比，5mM三七素组PC12细胞数量明显减少，胞体回缩，突触减少。其余各组细胞形态无明显变化，数量无减少。MTT结果与镜下观察结果相一致且0.01mM组有细胞增殖作用。结论：低剂量（<2.5mM）三七素对PC12细胞生长无明显抑制作用且有一定的促增殖作用；高剂量三七素对PC12细胞具有细胞毒性，抑制PC12细胞的生长。实验二低剂量三七素预处理对不同损伤模型下PC12细胞的保护作用目的：研究低剂量三七素预处理对损伤PC12细胞的保护作用和可能的作用机制。方法：建立谷氨酸损伤模型、慢性缺氧模型及过氧化氢损伤模型，细胞培养48小时后加入三七素（0.01mM）预处理96小时，然后加谷氨酸损伤4小时，用MTT法检测细胞活力和Hoechst33342/PI双重染色法来检测细胞的死亡变化。结果：MTT法显示4小时的谷氨酸损伤能造成50%的细胞损伤，三七素预处理组PC12细胞损伤情况明显减轻，Hoechst33342/PI双重染色法也得到相似的趋势。慢性缺氧损伤12小时可造成约30%细胞损伤，三七素预处理组细胞损伤大约10%。过氧化氢损伤细胞60%，三七素预处理组损伤细胞比率为50%，较单纯损伤组稍低，但两者差别不具有统计学意义，提示三七素对过氧化氢引起的细胞损伤无明显作用。结论：低剂量三七素预处理能够减轻谷氨酸损伤及慢性缺氧损伤导致的PC12细胞损伤及活力减低，提示三七素具有潜在神经保护作用，但其上述保护作用及对过氧化氢损伤PC12细胞无影响的具体机制有待进一步研究。实验三低剂量三七素对谷氨酸损伤的PC12细胞的治疗作用目的：研究三七素对谷氨酸损伤的PC12细胞的影响。方法：用谷氨酸复制体外培养的PC12细胞损伤模型，采用MTT法、Hoechst33342/PI双重染色法分别研究高、低剂量三七素对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的影响。结果：谷氨酸刺激后，PC12细胞存活率较对照组显著降低（P<0.05）、凋亡显著增强（P<0.05）。给予高剂量三七素可加重谷氨酸引起的PC12增殖力降低（P<0.05）、凋亡增强（P<0.05）。但低剂量三七素干预后，细胞存活率较模型组显著升高（P<0.05），凋亡较模型组明显降低（P<0.05）。结论：高剂量三七素可加重谷氨酸对PC12细胞的损伤，但低剂量三七素可显著减轻谷氨酸对PC12细胞的损伤，但具体机制尚有待于进一步研究。