论文部分内容阅读
马铃薯疮痂病（Potato common scab）是一种由多种植物病原链霉菌(Streptomycessp.)引起的土传病害，在我国各马铃薯产区均有发生。该病在薯块表面形成痂状病斑，降低商品薯的经济价值，带病种薯可随调运加速病害的传播。由于近年来我国马铃薯产业发展较快，疮痂病的发生地区和危害持续加重，因此有必要对疮痂病菌的组成情况进行及时跟踪分析；此外，由于传统方法对菌株致病性检测的过程耗时较长，本研究通过对致病菌株的分子遗传特点进行分析，探索致病菌株的分子检测方法，旨在明确我国目前存在的疮痂病原菌种类和获得快捷的致病菌检测手段。通过对2008-2012年间从我国北方马铃薯产区采集的马铃薯疮痂病薯进行菌株分离纯化，共获得链霉菌菌株183株；通过温室盆栽试验进行柯赫氏法则验证，发现其中42株具有致病性。利用菌株生物学特征和16S rDNA序列特征进行鉴定后，结果表明测试的42个菌株中包括6种疮痂病原菌，其中S. scabies、S. europaeiscabies15株、S. galilaeus17株、S. turgidiscabies2株、S. enissocaesilis3株、S. diastatochromogenes2株，还有3株待定菌株。本项研究结果证明我国目前存在多种马铃薯疮痂病原菌，其中S. scabies、S. europaeiscabies、S. galilaeus种为发生较多的优势种。为提高致病菌株的检测效率，缩短致病性鉴定的周期，本研究根据疮痂病原链霉菌具有特有的毒素合成基因簇的特点，选取其中的不同基因序列分别设计引物，选择5对引物对45株致病菌株和45株非致病菌株的基因组进行扩增，通过组合筛选确定检测致病菌株的引物组合。结果表明，测试的45个致病菌株中，引物TxtAB1/TxtAB2的检测效率为100%，所得片段长度为385bp；引物TxtA1/TxtA2的检测效率为100%，所得片段长度为398bp；引物Bu/Bd的检测效率为84%，所得片段长度为1470bp；引物Nf/Nr的检测效率为91%，所得片段长度为700bp；引物Tom3/Tom4的检测效率为89%，所得片段长度为392bp。测试的非致病菌株均未扩出txtAB、txtA、txtB片段，仅个别菌株能扩增出nec1或tomA。因此可以将这5对引物组合用于致病菌株的筛选。利用建立的检测方法和柯赫氏法则对马铃薯疮痂病斑上新分离到的12株链霉菌进行测试，成功筛选出4株致病菌株且两种方法取得的结果一致，验证了该方法的准确性。