论文部分内容阅读
研究目的： 1、观察大鼠在不同时长束缚浸水应激过程中,Th17/Treg细胞平衡的变化。 2、探讨脂微球载体前列腺素E1对应激性胃溃疡大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。 研究方法： 1、20只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(N组)、3.5小时应激组(S1组)、5小时应激组(S2组)及8小时应激组(S3组)。按不同时长制作应激性胃溃疡模型。造模完成后收集大鼠外周血分离淋巴细胞及血浆,采用荧光定量PCR方法分析Th17/Treg细胞相对应的转录因子RORγt/Foxp3mRNA的表达量,并计算比值。采用ELISA检测血浆IL-17A及TGF-β1水平,并评价胃溃疡指数。 2、40只雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(N组)、应激组(S组)、脂微球空载体10μg/kg组(L组)、凯时低剂量1μg/kg组(P1组)和凯时高剂量10μg/kg组(P2组)。后面四组经预处理后,制作3.5小时应激性胃溃疡模型。造模完成后采集外周血分离淋巴细胞及血浆,采用荧光定量PCR方法分析Th17/Treg细胞相对应的转录因子RORγt/Foxp3及分泌因子IL-17A/TGF-βmRNA的表达量,采用ELISA检测血浆IL-17A及TGF-β1水平,采用试剂盒检测血浆中的SOD活性及MDA浓度,并评价胃溃疡指数(UlcerIndex,UI)及制作病理切片。 研究结果： 1、通过大鼠胃黏膜观察,证明大鼠束缚浸水应激模型制备成功,且随着应激时间的延长,胃溃疡指数进行性升高(F=105.6,P=0.000)。各组大鼠外周血淋巴细胞Th17/Treg细胞相关转录因子RORγt、Foxp3mRNA表达差异均有统计学意义(F=4.434,P=0.019及F=7.385,P=0.003),但这两者的比值差异没有统计学意义(F=2.511,P=0.096)。其中与N组比,S2和S3组大鼠外周血淋巴细胞RORγt和Foxp3mRNA表达量均升高,其中以S2组大鼠两种因子mRNA及S3组的Foxp3mRNA表达量升高明显(p<0.05)。与N组比较,其余各组RORγt/Foxp3比值均是降低的,尤其在S1组和S3组降低明显(p<0.05),具有统计学意义。应激组(S1、S2和S3组)IL-17A均升高,其中S2组与S3组显著升高,差异有统计学意义(F=7.671,P=0.002),大鼠血浆TGF-β1水平随着应激时间的延长而呈升高趋势,但差异没有统计学意义(F=0.596,P=0.627)。 2、与应激组(S组)比较,脂微球空载体组(L组)各指标均无统计学意义,剔除了脂微球载体对脂微球前列腺素E1治疗应激性胃溃疡作用的影响。各组大鼠溃疡指数、血浆丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性差异均有统计学意义(F=46.75,P<0.0001;F=5.961,P<0.05及F=13.39,P<0.01)。其中,凯时药物治疗组(P1和P2)溃疡指数减轻,血浆MDA含量减少,SOD活性升高(p<0.05)。各组大鼠外周血RORγt、Foxp3mRNA表达及两者的比值差异均具有统计学意义(F=8.755,P<0.0001;F=2.736,P=0.0472及F=4.715,P=0.004)。而各组IL-17A及TGF-βmRNA差异没有统计学意义,各组大鼠血浆IL-17A表达水平差异具有统计学意义(F=3.798,P=0.0115)而TGF-β表达没有统计学意义(F=2.548,P=0.0565)。其中,与S组比,P2组大鼠外周血淋巴细胞Foxp3、TGF-βmRNA表达上调,血浆TGF-β1水平升高,RORγt/Foxp3比值降低具有统计学意义(p<0.05),而RORγt、IL-17AmRNA表达水平下降,但无统计学意义(p>0.05)。 研究结论： 1、应激性溃疡大鼠Th17/Treg细胞相关因子表达有变化,推测Th17/Treg细胞功能失衡参与了应激性胃溃疡的发生发展过程。 2、预先给予脂微球载体前列腺素E1治疗可以减轻大鼠应激性胃黏膜损伤,且前列腺素E1可能通过上调Treg细胞的表达,逆转应激引起的Th17/Treg细胞失衡。