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研究背景WNK4(with no K=lysine kinase)基因是新近分离克隆的一种蛋白激酶基因,该基因家族编码了一种特殊类型的丝氨酸—苏氨酸蛋白激酶。这种蛋白激酶在其亚结构域活性中心的关键位点由半胱氨酸取代了赖氨酸,而该位点的赖氨酸在其它蛋白激酶中高度保守,因此被称为无赖氨酸激酶。该基因第7外显子和第17外显子突变可导致一种常染色体显性遗传性疾病—假性低醛固酮血症(Pseudohypoaldosteronism typeⅡ,PHAⅡ)。PHAⅡ主要表现为高血压、高血钾和代谢性酸中毒。有研究报道WNK4基因定位于血压控制热点区域17q12-21上,因此WNK4基因可能与原发性高血压密切相关。Erlich PM.小组在美国白人和非洲黑人中均未发现extron7 C6749T(rs9916754)变异与其高血压相关。但有学者在中国高血压病高发地区辽宁省彰武县发现extron7 C6749T变异与其汉族人群高血压相关。以上两者研究结果截然不同的原因可能是由于高血压病的易感基因具有种族和民族的特异性。因此,我们需要以不同民族的群体为研究对象,探讨extron7 C6749T变异与高血压的关系。新疆哈萨克族是我国高血压患病率最高的五个民族之一,所以本课题拟以新疆哈萨克族群体为研究对象探讨WNK4基因extron7 C/T变异是否与该民族原发性高血压相关。研究目的1.研究WNK4基因第7外显子(extron7)C6749T变异在新疆哈萨克族群体中的分布。2.探讨WNK4基因C6749T变异与新疆哈萨克族群体原发性高血压间的关系。3.探讨WNK4基因C6749T变异与环境之间交互作用对高血压病的影响。研究方法本课题入选的所有研究对象来源于复旦大学遗传所于2001～2003年在新疆巴里坤县牧区进行高血压病流行病学调查时采集的哈萨克族牧民样本,剔除指标不全者共有897例(年龄≥30岁)。以1999年世界卫生组织/国际高血压协会诊断标准诊断高血压患者。调查前2周内服用降压药者及以往曾被诊断为高血压者也被纳入高血压组。所有研究对象均排除继发性高血压、心肌病、心力衰竭、先天性心脏病、风湿性心脏瓣膜病。采用Taqman探针技术,对该民族556例原发性高血压患者和341例血压正常者进行WNK4基因C6749T位点的多态性检测,研究高血压组和对照组间基因型和等位基因的频率分布,并采用多元Logistic回归法分析该基因变异和其他危险因素对高血压的作用;运用相加模型研究WNK4基因C6749T变异与环境之间交互作用对高血压病发病的影响。研究结果1.WNK4基因C6749T多态位点的基因型和等位基因在新疆哈萨克民族群体中的分布在897例研究对象中,CC基因型851例(94.9%),CT基因型45例(5.0%),TT基因型1例(0.1%)。等位基因频率分别为:C等位基因频率97.4%,T等位基因频率2.6%。2.高血压组和对照组间WNK4基因C6749T多态位点的不同基因型和等位基因频率分布的比较在高血压组中,CC基因型518例(93.2%),CT基因型37例(6.6%),TT基因型1例(0.2%)。等位基因频率:C等位基因频率96.5%,T等位基因频率3.5%。在正常对照组中,CC基因型333例(97.7%),CT基因型8例(2.3%),TT基因型0例(0.0%)。等位基因频率:C等位基因频率98.8%,T等位基因频率1.2%。高血压组和对照组间CC,CT+TT频率分布具有统计学意义(x~2=8.87,P=0.003)。C6749T多态位点T等基因频率在高血压组中的频率显著高于正常对照组(x~2=9.15,P=0.0025)。3.高血压患病的多因素分析(1)多元logistic回归模型分析发现年龄、体重指数、总胆固醇及C6749T变异可能是高血压的危险因素。(2)多元logistic回归模型控制了年龄、性别、BMI、TC、TG、GLU等混杂因素作用之后,WNK4基因C6749T变异与原发性高血压的发生相关,T等位基因携带者发生高血压的危险是CC基因型的3.57倍(x~2=9.69,P=0.002,OR=3.57,95%CI=1.60-7.90)(以基因型CC为对照)。(3)协方差分析控制混杂因素影响之后,发现C6749T变异与男性群体收缩压相关,与女性群体收缩压舒张压均相关。4.C6749T变异与环境的交互作用分析(1)WNK4基因C6749T变异与环境因素交互作用分析结果显示:WNK4基因C6749T变异与性别,BMI、GLU之间对高血压病具有正交互作用效应。C6749T变异与性别之间存在明显的交互作用,用多元logistic回归模型调整年龄、BMI、GLU、TG、TC之后,C6749T变异与性别之间交互作用的OR值为3.85(95CI:1.23～12.04)。具有WNK4基因C6749T变异的女性患高血压的危险性高于男性。(2)WNK4基因C6749T变异与BMI之间交互作用在高血压病中的作用分析结果显示:WNK4基因C6749T变异与BMI之间在高血压致病中具有正相加交互作用。多元logistic回归模型调整年龄、性别、GLU、TG、TC之后,C6749T变异与BMI之间交互作用的OR值为5.91(95CI:1.99～17.57)。(3)WNK4基因C6749T变异与GLU之间交互作用分析结果显示:WNK4基因C6749T变异与GLU之间在高血压致病中具有正相加交互作用。多元logistic回归模型调整年龄、性别、BMI、TG、TC之后,WNK4基因C6749T变异与GLU之间交互作用的OR值为8.77(95CI:1.04～73.93)。结论1.WNK4基因C6749T变异与新疆哈萨克族群体原发性高血压的发生可能相关。T等位基因可能是该民族原发性高血压发生的危险因子。2.本次研究首次对WNK4基因C6749T变异与环境因素做了交互作用分析,结果表明WNK4基因C6749T变异与性别、BMI、GLU之间对高血压病具有正相加交互作用。