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白附片因具有多种生理活性而在中医方剂中被广泛使用,其主要的生理活性成分为其所富含的乌头类生物碱,因此,从白附片中提取分离纯化乌头类生物碱具有较高的经济效益和社会效益。本文以白附片为原料,通过响应面实验设计优化总生物碱提取工艺条件,将所得粗提物利用大孔树脂进行分离,继而通过快速制备层析将其纯化得到单体化合物,并采用MS、NMR和X-射线单晶衍射技术对所得到的化合物进行结构鉴定和晶体解析,最后以牛血清白蛋白(BSA)为靶标,利用荧光光谱技术研究了该乌头类生物碱与BSA之间的相互作用。主要内容及研究结果如下:1、白附片中总生物碱的提取在单因素实验的基础上,采用响应曲面法对酸水法提取乌头类生物碱进行优化,优化提取工艺条件为:pH3.4,液料比11mL/g,提取温度30℃,提取时间4h,在此基础上,确定提取次数为连续三次提取。在此条件下,白附片粗提物得率为7.7%,其中总生物碱含量为0.74%。2、白附片粗提物大孔树脂的粗分离通过静态吸附洗脱试验和吸附等温线试验确定AB-8弱极性树脂对乌头类生物碱具有较好的吸附和洗脱效果;通过动态吸附洗脱实验确定最适上样条件和洗脱条件为:上样pH为4.5,上样浓度4.80mg/mL,上样量2柱体积,上样流速2.25BV/h,洗脱溶剂为30%乙醇水溶液,洗脱流速3BV/h,洗脱体积4.5BV。白附片粗提物经过大孔树脂粗分离后,粗生物碱浸膏的得率为6.7%,其中粗生物碱浸膏中总生物碱含量为8.5%。3、生物碱的分离纯化及结构鉴定依次通过硅胶层析法、C18柱层析后,结晶得到一生物碱化合物晶体;硅胶柱层析过程晶体粗产品的得率为6.2%,其中生物碱含量为72.1%;C18柱层析过程生物碱的得率为67.8%,纯度为色谱纯。通过MS、NMR确定了所得到的晶体化合物结构为16-O-次甲基-乌头次碱。用X-射线单晶衍射技术解析了16-O-次甲基-乌头次碱的晶体结构,发现该晶体属于正交晶系,空间群为P212121,其晶格常数为a=12.919,b=15.748,c=16.045,α=β=γ=90o,每个晶胞中含有4个16-O-次甲基-乌头次碱分子。4、16-O-去甲基-乌头次碱与BSA之间的相互作用研究利用荧光猝灭法研究了16-O-去甲基-乌头次碱与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。结果表明,16-O-去甲基-乌头次碱对BSA的内源荧光具有猝灭作用,并且16-O-去甲基-乌头次碱对BSA的荧光猝灭机理属于静态猝灭。16-O-去甲基-乌头次碱与BSA的结合是自发进行的,16-O-去甲基-乌头次碱与BSA二者之间的作用力主要为氢键和范德华力;16-O-去甲基-乌头次碱的加入除了使BSA中的酪氨酸残基和色氨酸残基附近的微环境疏水性略有降低外,对BSA整体构象无明显影响。