H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备与胶体金诊断试纸条的初步研制

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  采用蔗糖密度梯度离心纯化的H9N2亚型禽流感病毒作为抗原,免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞用聚乙二醇(PEG3000)作细胞融合,经有限稀释法克隆和亚克隆,获得1株能稳定分泌抗H9亚型禽流感病毒的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为4E7。经鉴定该杂交瘤细胞的平均染色体数为93条,腹水单克隆抗体的ELISA效价为1:256000。经Western-blotting证明单抗4E7经鉴定为针对75KD血凝素的单抗,HI效价为1:27,且不与新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、传染性脑脊髓炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H5N1亚型禽流感病毒发生交叉反应,具有较好的特异性。IgG亚型为IgG1。   用胶体金标记4E7单抗,包被玻璃纤维素膜,羊抗禽流感病毒彩抗包被硝酸纤维素膜,初步制备了诊断H9亚型禽流感的胶体金试纸条,可以检测到最佳的灵敏度为原倍的尿囊液,其HA效价为1:28。
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