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警犬和军犬在刑侦、缉毒、防爆、搜雷、守护、巡逻等警事和军事活动中具有无法用仪器设备替代的作用,愈来愈受到世界各国的重视。迄今,选择和培育警犬和军犬时所用的重要指标为行为性状,因此研究犬行为学及其分子标记具有重要的意义。我们以前的研究发现,MAO、COMT、TH、DβH等候选基因的单核酸多态性和微卫星标记与二月龄幼犬行为密切相关,并且建立了稳定的分析方法。本研究在以前的研究基础上,选择128只成年犬作为研究对象,其中德国牧羊犬(German shepherd dog)60只,罗威纳犬(Rottweiler)68只。行为测试指标共12项,包括兴奋性强度指标6项、抑制性强度指标4项和灵活性强度指标2项,并且我们同时利用PCR—RFLP分析了一些与人类性情相关的候选基因,如:单胺氧化酶(MAO)、5—羟色胺受体2C基因(HTR2C)、儿茶酚胺转移酶(COMT)、谷氨酸转运体—1基因(GLT-1)和谷氨酸/天冬氨酸转运体基因(GLAST)。最后,利用SAS统计软件分析了候选基因多态性及其与行为性状的相关性,以寻找犬行为性状相关的分子标记,为建立犬行为性状的分子标记辅助育种方法奠定理论基础。主要内容如下:1.德国牧羊犬和罗威纳犬主要行为性状测试及与年龄、性别和品种的关系根据Miller(1985)、Hart(1985)和Bradshaw(1996)等的测试程序,测定了12个行为性状指标,每个行为性状有4个等级,根据行为测试过程中的具体行为表现给予评分。利用SAS统计软件对品种、性别和年龄之间比较,结果表明:除了食欲反射强度外,其他所有行为数据在两个品种之间没有显著差异(p>0.05),但性别对犬行为影响比较大:所有公犬兴奋性性状都高于母犬兴奋性性状,其中食欲反射强度、防御反射和自由反射均达到显著水平(p<0.05或p<0.01)。除分化抑制强度外(p<0.05),所有公犬抑制性性状都低于母犬抑制性性状,但是没有达到显著水平。根据实验用犬的年龄结构,分为两组进行数据分析,数据显示:所有小于3岁组的行为数据都高于大于3岁组,其中猎取反射强度和自由反射强度两项数据差异极显著(p<0.01)。2.单胺氧化酶(MAO)基因多态性与犬行为性状的关联分析以单胺氧化酶B基因编码区的单核苷酸多态位点SNP(T199C)为犬行为性状的候选基因,采用PCR-RFLP法分析其在2个品种中的单核苷酸多态频率分布,以及MAOB基因多态性与犬行为性状的关系。结果显示:T等位基因频率在两个品种中均占有优势,此位点基因多态性对犬猎取反射强度、姿势反射强度和探求反射强度有显著影响;CC型个体的姿势反射强度高于TT型个体(p<0.05),但对于探求反射强度恰好相反(p<0.05);TC型个体的猎取反射强度高于CC型个体(p<0.05)。实验结果表明:T等位基因对犬个体的猎取反射和探求反射有显著影响。3.5—羟色胺受体基因以及相关微卫星位点多态性与犬行为性状的关联分析对犬5—HTR2C受体基因进行多态性进行了分析,在编码区840位发现了一个A/G同义突变,并建立了HTR2C(A840G)的dCAPS分析方法,以及HTR2C(A840G)基因多态性与犬行为性状的关系。结果显示:罗维纳犬中不存在多态性,同样A等位基因在德国牧羊犬中占有绝对优势。AA型个体的食欲反射强度高于GG型个体(p<0.05),但对于猎取反射强度两基因型之间恰好相反。实验数据显示:HTR2C(A840G)基因多态性可能对于犬的食欲反射和猎取反射有影响。此外,分别在德国牧羊犬上统计了两个微卫星位点:HTR1B(GA)n和HTR1A(CA)n。4.儿茶酚胺转移酶(COMT)基因多态性与犬行为性状的关联分析对犬儿茶酚胺转移酶(COMT)基因部分序列进行分析,在该基因的内含子前第9个位点发现了一个A/G突变,利用PCR—RFLP建立起了分型方法。结果显示:GG基因型只在罗维纳犬中存在,并且AA基因型在两个犬品种中均占用优势。此位点基因多态性对犬超限抑制强度有显著影响:AG型个体的超限抑制强度高于GG型个体(p<0.05)。5.谷氨酸转运体—1基因(GLT-1)及谷氨酸/天冬氨酸转运体基因(GLAST)多态性与犬行为性状的关连分析在GLT-1基因的3’-UTR区域的2170位点发现了一个T/A突变,在GLAST的3’-UTR区域发现了两个突变位点:一个在2648位点发现了一个A/T突变,另一个在2652位点发现了一个G/A突变,并分别建立了dCAPS分析方法。GLT-1(T2270C)位点在德国牧羊犬中不存在多态性,但在罗维纳犬中T等位基因和C等位基因的基因频率几乎相等,分别是52.2%和47.8%;GLAST(T2648A)位点中,AA基因型在两个品种中均占较低的比率,分别是5%和3%;GLAST(G2652A)中,A等位基因在整个试验群体中占有绝对优势。对三个多态位点与犬行为作关联性分析,GLT-1(T2170C)位点基因多态性对食欲反射强度、自由反射强度和兴奋转抑制强度有显著影响:TT基因型个体的食欲反射强度高于CC型个体,TC基因型个体的自由反射强度及兴奋转抑制强度均高于CC型个体(p<0.05);对于GLAST(T2648A)来说,AA基因型个体的外抑制强度高于TT型个体,但AT基因型个体的超限抑制强度低于TT基因型个体(p<0.05);对GLAST(G2652A)来说,其中AA基因型个体的分化抑制强度低于AG型个体和GG型个体。