Myocilin蛋白对人眼小梁网细胞FN表达及细胞迁移与粘附的影响

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目的在体外培养人眼小梁网细胞的基础上,研究myocilin蛋白对人眼小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达以及对小梁网细胞迁移、粘附功能的影响,探索myocilin蛋白与原发性开角型青光眼发病的关系。方法采用组织块培养法体外培养正常人眼小梁网细胞,并运用倒置显微镜观察、透射电镜和免疫细胞化学等方法对细胞进行鉴定。取传三代的小梁网细胞分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0ug/m(l对照组)、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的无血清培养基,继续培养24小时后,运用Western blot、Elisa法分别检测小梁网细胞内及细胞培养液中FN的表达水平;运用Transwell小室法、CCK-8法检测myocilin蛋白对小梁网细胞迁移、粘附的影响。结果1.成功建立人眼小梁网细胞体外培养体系,经鉴定确定为人眼小梁网细胞。2. Western blot检测结果显示,在一定范围内,随myocilin蛋白浓度的增高小梁网细胞内FN表达呈下降趋势。3. Elisa法检测经浓度为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml myocilin蛋白干预的各组细胞培养液中FN浓度为:0.5817±0.0959ug/ml、0.5572±0.0443ug/ml、0.5868±0.0735ug/ml、0.5015±0.0472ug/ml、0.4263±0.0426ug/ml、0.2838±0.0972ug/ml。1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml myocilin蛋白组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),且此三组实验组组间比较存在显著性差异。4.Transwell小室法检测结果显示,实验组细胞迁移数较对照组少,且实验组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。5.运用CCK-8法检测经浓度为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/mlmyocilin蛋白处理的各组细胞吸光度值的均值分别为0.1614±0.0061、0.1529±0.0139、0.1273±0.0172、0.1271±0.0230、0.1165±0.0084、0.1103±0.0045。随myocilin蛋白浓度的增高各组细胞吸光度值呈现下降趋势,各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.myocilin蛋白能抑制小梁网细胞纤维连接蛋白的表达,并呈现一定的剂量依耐性;2.myocilin蛋白可降低小梁网细胞的迁移和粘附能力。
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