化感自毒物质降解菌筛选及青枯病生防应用

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邻苯二甲酸及其产物邻苯二甲酸酯(PAEs),已经渗透到了食品、药品、人体、食品药瓶包装产品、水体和陆地生态系统,对生态系统和人类健康造成了极大危害,被视为全球普遍的污染物。邻苯二甲酸及其衍生物在土壤中的富集是导致烟草、大豆、玉米等重要经济作物连作障碍和土传病虫害发生的重要物质,造成了严重的经济损失。消除邻苯二甲酸及其酯类物质对环境,人类和作物的危害是环保研究领域热点之一。消除邻苯二甲酸及其酯类物质方法主要有物理、化学和生物学方法,物理化学方法由于存在二次污染的风险,同时限于工业废水中邻苯二甲酸及其酯类物质处理等因素,并未得到广泛应用。而生物学的方法特别是利用微生物降解邻苯二甲酸及其酯类物质的方法备受关注,在微生物体内邻苯二甲酸酯首先被水解成邻苯二甲酸单酯,再被水解为邻苯二甲酸,最后被降解成有机酸为微生物提供营养。因此,微生物降解邻苯二甲酸是生产邻苯二甲酸酯最大的特点是效率高、成本低和环境友好型。从环境中筛选或驯化PAEs高效降解菌株是最简易和经济的方式,目前高效降解菌主要有节杆菌(Arthrobactersp.)、假单胞菌(Pseudomonas sp.)等。所有这些单一菌都存在底物单一,降解不彻底等缺陷,复合菌群虽然克服了底物单一性缺陷,在一定程度上提高了降解效率。但是无论单一菌种还是复合菌群,多数研究集中在解决邻苯二甲酸酯降解环节,而对于邻苯二甲酸的降解关注较少,很可能是导致土壤环境中邻苯二甲酸含量最高的原因。另外,以前的研究大多数局限于实验室内摇瓶发酵,降解菌在土壤环境中是否仍然能够发挥作用方面的研究报道较少。再者,土壤环境中的微生物被视为自然界中最大的生物多样库,蕴藏着更高效的邻苯二甲酸及其酯类物质降解菌。基于以上原因,本文通过从污水处理厂淤泥,连作烟草烟田中筛选能特异性降解邻苯二甲酸,对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的微生物,并在液体培养基和盆载土壤中检测其对对应的化感物质的降解能力,以及添加化感物质降解菌后烟苗生长的变化和烟草叶片抗氧化酶等酶活的变化,并且对青枯菌的有着抑制的效果,具体结果如下:[1]筛选到能降解邻苯二甲酸,对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的菌株,通过生理生化和分子生物学鉴定,分别命名为Enterobacter sp.NO3,Stenotrophomonas sp.NO10和Bacillus sp.N013;[2]通过单因子实验得出Enterobacter sp.N03的最适生长条件是30℃,pH7,邻苯二甲酸浓度500mg/L;Stenotrophomonas sp.NO10的最适生长条件是30℃,pH6,对轻基苯甲酸600 mg/L;Bacillus sp,N013的最适生长条件是37℃,pH8,对羟基苯甲醛800 mg/L。[3]在盆栽实验中的邻苯二甲酸降解菌,对羟基苯甲酸降解菌和对羟基苯甲醛降解菌均能缓解由于邻苯二甲酸,对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛积累对烟草的抑制效应;[4]通过趋化效应实验发现邻苯二甲酸和对羟基苯甲醛能够吸引青枯菌,使其在邻苯二级甲酸和对羟基苯甲醛积累处聚集;[5]通过盆栽实验发现,在邻苯二甲酸,对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛积累的土壤中,烟草青枯病病原菌数量上升,添加对应降解菌后青枯病病原菌数量下降;[6]通过盆栽实验发现,添加化感物质引起叶片中抗逆相关酶活的变化,加入对应的降解菌后酶活恢复。
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