目的:通过糖尿病动物模型,从新型委陵菜黄酮衍生物中筛选具有抗糖尿病活性的候选化合物。观察抗糖尿病候选化合物对2型糖尿病动物模型的降血糖作用,并从改善胰岛素抵抗,调节糖、脂代谢,抗氧化、抗炎等方面阐明黄酮衍生物对糖尿病模型小鼠的影响。初步探讨Fla-CN抗糖尿病作用机制,为进一步衍生合成得到活性更强的衍生物及发现新药候选化合物提供理论基础和依据。方法:1.采用80mg/kg四氧嘧啶尾静脉注射建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,挑选建模合格的小鼠,随机均匀分组。分为模型组,给予不同剂量的新型委陵菜黄酮衍生物组、另设正常对照组。每组动物每日灌胃一次,连续灌胃15天。每周测量一次小鼠体重和空腹血糖水平;给药2周后测定口服葡萄糖耐量。实验结束时眼静脉丛取血,测定血清甘油三酯和总胆固醇水平。2.采用C57BL/Ksj-db/db小鼠50只,随机分为5组,衍生物Fla-CN高、中、低剂量组、阳性对照组和模型组;另设正常对照组(db/m+小鼠)。连续给药4周,检测各组动物口服糖耐量(OGTT)、胰岛素耐量(ITT)、血清胰岛素(INS)、血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、血清游离脂肪酸(NEFA)、血清低密度脂蛋白(LDL)、血清高密度脂蛋白(HDL)、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。3.采用Western Blot检测各组db/db小鼠肝脏组织和脂肪组织中AMPK、Akt、ACC蛋白的磷酸化水平;采用RT-PCR检测肝脏组织和脂肪组织中miRNA29b、miRNA29c、miRNA33a 和 miRNA33b 基因转录水平。结果:1.四氧嘧啶尾静脉注射3天后挑选空腹血糖即达FBG≥11.1mmol/L为四氧嘧啶糖尿病模型小鼠。动物出现典型的“三多一少”症状,说明本试验的糖尿病小鼠模型是成功且稳定可靠的。经给药15天后,与模型组比较,各新型委陵菜黄酮衍生物均可不同程度的降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠空腹血糖;衍生物Fla-CN、Fla-OEt、Fla-Me、Fla-Cl均可显著降低血清TC和降TG水平。2.委陵菜黄酮衍生物Fla-CN与Fla-OEt具有显著的降低小鼠空腹血糖(P<0.05或P<0.01)和降血脂作用(P<0.05或P<0.01),而且降血糖作用效果相当或优于二甲双胍;在OGTT实验中均对糖尿病小鼠的糖耐量有显著的改善作用;此外,Fla-CN能明显改善四氧嘧啶糖尿病小鼠的外部体征、明显增加小鼠的体重。综合各实验结果显示Fla-CN是较其他衍生物更具有进一步研究价值的抗糖尿病候选化合物。3.db/db小鼠试验前自身存在肥胖、多饮多食的症状,给予不同剂量的Fla-CN治疗4周后db/db小鼠的体重、进食量均无明显变化,Fla-CN对db/db小鼠体重、进食量无影响。给药4周后,与模型组比较,Fla-CN可一定程度的降低db/db小鼠的空腹血糖、血清胰岛素浓度,改善糖耐量、胰岛素耐量,降低血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、游离脂肪酸、丙二醛、肿瘤坏死因子TNF-α的浓度,提高血清高密度脂蛋白浓度、超氧化物歧化酶活力;且Fla-CN各剂量组间存在一定的量效关系,Fla-CN高剂量的作用效果与二甲双胍相当。4.与模型组相比,Fla-CN可以提高肝脏和脂肪组织中AMPK、ACC和Akt磷酸化的水平;降低肝脏和脂肪组织中miR-29b、miR-29c的表达水平,且作用效果优于或相当于二甲双胍,各剂量组存在一定的量效关系。结论:新型委陵菜黄酮衍生物具有良好的降血糖、降血脂作用,其中Fla-CN是较其他衍生物更具有进一步研究价值的抗糖尿病候选化合物。Fla-CN可改善2型糖尿病db/db小鼠的糖、脂代谢紊乱和IR,同时具有抗氧化,抗炎的作用。其作用机制可能与上调肝脏和脂肪组织中p-AMPK,p-ACC及p-Akt水平,降低肝脏和脂肪组织miR-29b和miR-29c的表达水平有关。