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大量研究表明,原癌基因RET和Hedgehog (Hh)信号通路的异常表达均与发育和肿瘤的发生发展密切相关,但RET是否调控Hh通路却鲜有报道。基于以上疑问,本研究首先借助Hh靶基因Gli-1的双荧光素酶报告基因系统,发现内源表达RET的成神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y经RET蛋白激活物胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell-line derived neurotrophic factor, GDNF)处理,Gli-1报告基因的活性增加。进一步在293T细胞和SH-SY5Y细胞中共转RET过表达质粒和Gli-1报告基因质粒,发现在这两种细胞系中过表达RET均可增加Gli-1报告基因活性,证实RET参与调控Hh通路。过表达RET下游分子Akt的激活形式可增加Gli-1报告基因活性。而使用MK-2206抑制Akt活性或慢病毒敲降Akt后,激活RET并不能上调Gli-1的mRNA水平,证实RET通过Akt调控Hh通路。进一步,为研究Hh通路中的哪个分子是RET调控的靶点,我们利用Cyclopamine特异性抑制该通路的关键分子Smoothened (SMO)的活性,发现激活RET依然能增加Gli-1的mRNA水平,提示RET可能作用于膜受体SMO的下游。通过对SMO下游相关分子PKA、GSK3β、CK1的磷酸化水平检测,发现激活RET或Akt能降低GSK3β的磷酸化。因GSK3β负向调控Hh通路,抑制GSK3β则可激活Hh通路,且该作用不受MK-2206或RET敲降影响,提示RET/Akt可通过抑制GSK3P活性来激活Hh通路。最后,细胞增殖试验表明,RETshRNA.MK-2206以及Cyclopamine处理SH-SY5Y细胞,都能抑制该肿瘤细胞的增殖能力。综上所述,本研究初步证明RET可通过激活Akt,进而抑制GSK3β的磷酸化,最终激活Hh通路来影响肿瘤细胞的增殖水平。