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研究背景血管化复合组织移植（Vascularized CompositeAllotransplantation，VCA）在严重毁损伤的修复重建中获得了良好的效果，但术后免疫排斥反应仍是其广泛应用于临床所面临的主要障碍。在移植排斥反应中T细胞起到了十分重要的作用，调节性T细胞（Regulatory T Cells，Tregs）由于能够抑制T细胞的功能而得到广泛研究。Tregs分为胸腺来源的天然调节性T细胞（Natural Regulatory T Cells，nTregs）和外周来源的诱导性调节性T细胞（Induced Regulatory T Cells，iTregs）。幼稚CD4+T细胞（Na veCD4+T Cell）在体外可通过诱导的方式转化为iTregs，有研究证明此类iTregs能够逆转Tregs在炎症环境下向Th17细胞的转化，在自身免疫性疾病的治疗中取得了较nTregs更好的效果，但其在移植排斥反应中的作用尚未完全明确。目的通过体内外实验检测iTregs抑制移植排斥反应的作用，体外分选与诱导na veCD4+T细胞获得iTreg，检测其对效应T细胞（Effective T Cells，Teffs）的增殖是否具有抑制功能。并在体内通过小鼠异体皮片移植模型研究iTreg的迁移，以及输注iTreg后是否能够使异体皮片存活时间延长，从而验证iTreg是否具有抑制移植排斥反应的作用。方法分选na ve CD4+T细胞，在白介素-2（Interleukin-2，IL-2），转化生长因子β（Transforming Growth Factor β，TGF-β）存在的条件下进行细胞培养，4天后收取细胞行流式细胞术检测iTreg所占百分比，将获得的iTregs与CD4+CD25-的Teffs以不同比例混合共同培养，验证iTregs在体外是否具有抑制Teffs增殖的能力。使用MHC完全错配的C57BL/6和Balb/c小鼠分别作为供体和受体建立小鼠异体皮片移植模型，静脉输注5×106羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（Carboxy Fluoroscein SuccinimidylEster，CFSE）标记的iTregs，观察iTregs在体内的迁移。比较输注3×106iTregs的实验组小鼠与输注等体积磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）的对照组小鼠的皮片存活时间有无差异。对排斥终点的皮片取材进行组织病理学检查，比较两组病理切片中炎症细胞的浸润情况。结果分选的na ve CD4+T细胞百分比均超过90％，诱导后的细胞中CD4+CD25+Foxp3+细胞的比例平均为44.2％；共培养结果显示iTregs具有抑制Teffs增殖的能力，且这种抑制能力具有剂量依赖性。输注CFSE染色的iTreg后，3d在胸腺和淋巴结可见CFSE的表达，6d未见表达。iTreg组比对照组小鼠皮片存活时间由对照组的11天延长到13.4天（P＜0.05），苏木精-伊红染色（Hematoxylin-Eosin staining，HEstaining）显示iTreg组淋巴细胞与嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润明显较对照组轻。结论本文所采取的诱导方法能够在短时间内获得较高纯度的Treg，这种iTreg具有抑制效应T细胞增殖的能力，输注入体内后能在体内存活与迁移，并能延长小鼠异体皮片的存活时间。iTregs确实具有一定的抑制移植排斥反应的功能，但单独使用iTregs无法诱导免疫耐受。