紫花松果菊再生体系的建立及挥发油生物活性的研究

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紫花松果菊(Echinacea purpurea L.)又名紫锥菊,为菊科松果菊属多年生草本植物,具有很强的免疫功能和抗菌消炎、抗病毒等作用,是一种极具开发价值的药用植物。本文一方面通过植物组织培养技术建立紫花松果菊再生体系,另一方面运用GC-MS技术对紫花松果菊不同部位的挥发油化学组分进行分析,并对紫花松果菊挥发油的油脂抗氧化、体外抑菌及对酪氨酸酶活性的抑制作用进行了研究,旨为紫花松果菊的种植、开发与利用提供理论依据和技术支撑。研究成果如下1、建立起一套高效快速的紫花松果菊离体再生体系。本文通过研究促进松果菊种子萌发的最适赤霉素浸泡浓度及种子消毒的最佳处理组合,筛选出了促进松果菊种子萌发的赤霉素浓度及适合松果菊种子的灭菌措施。灭菌后的种子置MS培养基中培养获得无菌苗,以无菌苗的叶片为外植体,研究了不同植物激素浓度及其组合对松果菊愈伤组织诱导,不定芽诱导及增殖的影响,研究了不同植物激素对不定根分化的影响,筛选出适合松果菊组织培养的最适培养基。结果表明:在研究范围内,400mg/L的赤霉素浸泡可促进松果菊种子的萌发,适合松果菊种子的灭菌措施为:75%酒精30s+0.1%升汞10min;松果菊愈伤组织诱导的最佳条件是先暗培养一周然后进行光照培养,最佳激素组合为MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.5mg/L+2,4-D1.0mg/L;不定芽诱导的最佳激素组合是MS+6-BA1.0mg/L;不定芽增殖的最佳激素浓度是6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;MS培养基+0.5mg/LIBA为不定根分化的最佳培养基;试管苗移栽的最适基质为蛭石:珍珠岩:草炭(1:1:1)。2、利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析比较了紫花松果菊不同部位挥发油的化学组分。花中分离鉴定了36种化合物。其中萜类化合物25种,占挥发油总量的91.39%,全部为倍半萜。芳香族化合物1种,占挥发油总量的0.65%,脂肪族化合物10种,占挥发油总量的7.53%。花的挥发油中主要成分为β-衣兰烯(15.8%)、荜澄茄油烯(8.13%)、大根香叶烯-D(20.84%)。根中分离鉴定了30种化合物,其中脂肪族化合物10种,占挥发油总量的65.84%;含有的萜类物质19种,含量为33.49%,其中反,反-2,4-癸二烯醛为单萜,其余均为倍半萜;芳香族化合物1种,含量为0.68%。根的挥发油中主要化学成分为1,11-十二碳二烯(12.49%)、棕榈酸(36.13%)、亚油酸(10.44%)。花与根挥发油中相同的成分有14种。3、研究了紫花松果菊挥发油对菜籽油和猪油的抗氧化性能。实验以过氧化值、酸值及TBA值为指标,以菜籽油和猪油为介质,并与人工合成抗氧化剂BHT和BHA进行对照。结果表明:在所研究的浓度范围内,紫花松果菊挥发油对菜籽油和猪油均具有一定的抗氧化作用,且具有剂量效应关系。其中,添加量为2g/kg的紫花松果菊挥发油对菜籽油的抗氧化效果较为明显,几乎等效于0.2g/kgBHT和BHA的抗氧化作用。紫花松果菊挥发油对猪油的抗氧化效果则不及对菜籽油的抗氧化效果明显。4、研究了紫花松果菊挥发油对酪氨酸酶单酚酶及双酚酶活性的影响。以L一酪氨酸及邻苯二酚作底物,采用分光光度法进行测定,并以熊果苷为对照。结果表明,不同浓度的紫花松果菊挥发油对酪氨酸酶单酚酶及双酚酶活性均有一定的抑制作用,且具有剂量效应关系。与熊果苷的对比可知,松果菊挥发油对酪氨酸酶单酚酶和双酚酶的抑制作用均强于熊果苷。5、研究了紫花松果菊挥发油体外抑菌作用。以山梨酸钾做对照,通过杯碟法研究了紫花松果菊挥发油对常见的霉菌和细菌的抑制作用,并采用倍比稀释法测定了最小抑菌浓度。结果表明:紫花松果菊挥发油对几种细菌均有抑制作用,且对几种细菌抑制能力为金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>枯草芽孢杆菌>四联球菌。紫花松果菊挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和四联球菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为:0.625%、1.25%、2.5%、2.5%。紫花松果菊挥发油对霉菌无明显抑制作用。
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