华中枸骨和榕叶冬青的化学成分与生物活性研究

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冬青属是冬青科中最大的一个属,大约包含有400-500种植物。冬青属植物含有多种化学成分,具有广泛的药理活性。很多种在中国广泛分布,在民间作为中草药广泛使用。华中枸骨和榕叶冬青是我国常见的两种药用冬青属植物。为了更好的开发利用这两种冬青属药用资源,本课题对这两种植物叶的生物活性和化学成分进行了深入研究。一、华中枸骨和榕叶冬青叶乙醇提取物抗炎和自由基清除活性比较研究了华中枸骨和榕叶冬青叶的乙醇提取物体内抗炎和体外自由基清除活性。抗炎活性采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型和大鼠棉球肉芽肿模型,同时测定慢性炎症模型大鼠血清中抗氧化酶活性,自由基清除活性通过测定它们对DPPH,超氧阴离子自由基和羟基自由基清除作用。结果显示,华中枸骨乙醇提取物显示很强的抗急性炎症和慢性炎症活性,无口服急性毒性。榕叶冬青乙醇提取物显示极弱的抗急性炎症和中等抗慢性炎症活性。华中枸骨乙醇提取物能显著抑制慢性炎症大鼠血清中丙二醛的形成,提高血清中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性。而榕叶冬青乙醇提取物给予高剂量仅能提高超氧化物歧化酶的活性并减少丙二醛的形成。华中枸骨乙醇提取物体外清除自由基活性明显高于榕叶冬青乙醇提取物。因此,华中枸骨乙醇提取物具有很强的抗炎和自由基清除活性,抗炎机制某种程度上与提高体内抗氧化酶活性有关,该研究结果为华中枸骨在民间治疗关节炎提供一定科学依据。二、华中枸骨化学成分及部分单体化合物细胞毒作用研究对华中枸骨叶的乙醇提取物进行系统的化学成分研究,从其乙酸乙酯萃取部位分离得到14个化合物,其中黄烷类化合物6个:(2S)-5,3’,4’-三羟基-7-甲氧基黄烷(IC1),(2S)-5,3’,4’-三羟基-7-甲氧基黄烷(IC2),(2S)-5,4’-二羟基-7,3’-二甲氧基黄烷(IC3),(2S)-5,4’-二羟基-7-甲氧基黄烷(IC4),(2R)-7,3’,4’-三甲氧基-5,8-醌黄烷(IC5),(2S)-7-甲氧基-4’-羟基-5,8-醌黄烷(IC6);黄酮类化合物3个:柚皮素(IC7),山奈酚(IC8),槲皮素(IC9);三萜类化合物3个:齐墩果酸(IC10),熊果酸(IC11),熊果醇(IC12);甾醇类化合物1个:β-谷甾醇(IC13);多酚类化合物1个:对二苯酚(IC14)。化合物IC1,IC5,IC6为新化合物,化合物IC2为新的天然产物。利用MTT法测定6个黄烷类化合物IC1-6对人肝癌细胞HuH7和人结肠癌细胞Caco-2细胞毒作用。结果表明,它们对Caco-2细胞基本无细胞毒作用,抑制Caco-2细胞的半数有效浓度均大于100μg/ml。对人肝癌细胞HuH7,IC3,IC4具有很强的抑制作用,半数有效浓度IC50分别为8.98μg/ml,13.04μg/ml。而IC1,IC2,IC5,IC6显示相对较弱的抑制作用,半数有效浓度IC50分别为25.77μg/ml,26.42μg/ml, 20.20μg/ml,22.48μg/ml。三、榕叶冬青的化学成分研究对榕叶冬青叶的乙醇提取物进行系统的化学成分研究,从中分离得到17个化合物,其中三萜类化合物6个:无羁萜(IF1),4-异无羁萜(IF2),羽扇豆醇(IF3),齐墩果酸(IF4),3-乙酰齐墩果酸(IF5),3β-乙酰-6α,13β-二羟基齐墩果烷-7-酮(IF6);苹果酸类衍生物2个:2-(4-羟基-苄基)-苹果酸(IF7),2-(4-羟基-苄基)-苹果酸-4-乙酯(IF8);蒽醌类化合物3个:大黄素(IF9),大黄酚(IF10),大黄素甲醚(IF11);各种苷类化合物4个:槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷(IF14),金丝桃苷(IF15),顺式丁香苷(IF16),乙基-O-β-L-阿拉伯糖苷(IF17);甾醇类化合物2个:β-谷甾醇(IF12),α-菠甾醇(IF13)。这些化合物均为首次从榕叶冬青中分离得到,化合物IF8初步确定为新化合物。
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