本研究首先建立肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的动物模型,利用丝裂霉素对小鼠进行腹腔注射预处理,并通过灌胃接种和腹腔注射两种途径,建立了O157:H7感染的动物模型。然后对EHEC O157:H7 ler/stx基因缺失突变菌株的原噬菌体及其原始整合位点进行分析。通过对Stx A亚基毒性活性区和跨膜区的定点突变,消除或降低Stx的细胞毒性,并将Stx的无毒性或弱毒性突变体导入O157:H7 ler/stx基因缺失突变菌株,构建O157重组弱毒疫苗菌株。利用小鼠模型和vero细胞对O157重组弱毒疫苗菌株的vero细胞毒性、对小鼠的致病性、重组菌株的稳定性,以及被动免疫和主动免疫保护性进行了研究。结果表明,O157重组弱毒疫苗菌株具有良好的稳定性,对vero细胞的毒性作用降低了约104倍,丧失了对小鼠模型的致病性,能有效缩短小鼠感染O157:H7强毒株后的排毒时间(免疫组小鼠第6天后粪便内即检测不到强毒株,而未免疫对照组第13天仍可检测到)。用疫苗菌株对母鼠免疫,免疫母鼠所生的乳鼠通过吸吮母乳,能够获得良好的被动免疫保护作用(F25和F105的免疫保护率分别为75.2%和83.0%);通过腹腔注射的途径对小鼠进行免疫和攻毒,结果也表明O157重组弱毒疫苗菌株对小鼠具有良好的免疫保护作用(F25和F105的免疫保护作用分别为11/20和14/20)。