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目的:子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)是一种常见的妇科疾病,其严重影响着女性的生活和健康。本病常见于生育年龄女性,以25~45岁女性多见,发病率约为10%,且近年呈上升趋势。虽然其在形态学上呈良性表现,但在临床行为学上具有类似恶性肿瘤的特点,如种植、侵袭及远处转移等。本病的治疗方法有手术及药物,除根治性手术外,尚无一种理想的根治方法,无论是药物或保守性手术均有相当高的复发率。近年来,EMs与凋亡的关系日益受到重视,越来越多研究表明,异位子宫内膜细胞得以在宫腔外种植并继续存活,与其凋亡特性改变有关。有研究表明内异症女性子宫收缩强度及频率显著高于正常女性,导致子宫轻度缺血缺氧(包括内膜);而又有大量的研究证明组织器官经过缺氧预处理(hypoxia preconditioning, HPC)后,能够增强其对随后严重缺血缺氧所致凋亡的耐受性,HPC正成为组织损伤学和器官移植学研究的热点,而与之相似的缺氧预处理与凋亡的关系也成为研究的新方向。我们通过体外培养子宫内膜细胞,建立子宫内膜的HPC模型及其对照组,比较各组间凋亡有关基因及其蛋白的表达就可以进一步验证HPC对子宫内膜的保护作用。通过阻断缺氧预处理对凋亡的保护通路就可以有效抑制异位内膜的活性来预防其发生或降低复发,为EMS的临床治疗提供新的思路。方法:1.选择因子宫肌瘤行(次)全子宫切除手术的病例8名,术中刮取其子宫内膜,经酶解、过滤、贴壁纯化等技术体外分离培养子宫内膜基质细胞,并行免疫荧光细胞鉴定,通过CCK-8测定细胞生长曲线。2.对传代后的细胞进行处理,待细胞融合致70%时分为五组:HPC组、HPC+缺氧组,ly294002+HPC+缺氧组,缺氧组、对照组。1)HPC:细胞间断缺氧1h,复氧1h(共3个循环)后置于37℃、5%CO2的细胞培养箱培养;2)HPC+缺氧组:细胞间断缺氧1h,复氧1h(共3个循环)后置于缺氧培养箱培养;3)ly294002+HPC+缺氧组:ly294002以50um的浓度加入培养基,如2)处理。4)缺氧组:细胞置于缺氧培养箱中培养72小时;5)对照组:细胞置于37℃、5%CO2细胞培养箱培养。3.干预72小时后,撤离处理条件后同一时间点分别收集各种因素作用后的细胞,测定各组的凋亡指数及AKT、Bcl-2、HIF、VEGF的mRNA水平及AKT蛋白表达。结果:1.8例标本培养基质细胞,6例成功,1例细菌污染,另1例细胞数较少,培养失败。原代培养的细胞中,波形蛋白染色阳性。细胞在接种后5-8天接近铺满,生长至第6天进入指数生长期,传至2-3代后基质细胞纯度高达98%以上。2.HPC+缺氧组AKT、HIF、VEGF基因表达明显高于对照组(P<0.05), HPC+缺氧组AKT蛋白表达明显高于对照组。3. HPC+缺氧组细胞凋亡指数明显低于缺氧组(P<0.05),ly294002+hpc+缺氧组凋亡指数明显高于hpc+缺氧组(P<0.05)。结论:缺氧预处理可以保护缺氧对子宫内膜基质细胞的损伤,其作用的发挥跟AKT信号通路有密切关系。如果我们特异性控制AKT信号通路就可以有效调节子宫内膜异位症异位内膜对缺氧的耐受性,从而降低子宫内膜异位症的发病率和复发率。对子宫内膜的治疗开辟一种新的治疗方法。