血管渗漏性增高是病理性新生血管(如恶性肿瘤、糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy，DRP)、角膜新生血管等)的重要特征。液体、血浆蛋白、活性分子和细胞的渗出导致组织水肿、机化和免疫微环境的破坏，从而加重炎症反应，并促进肿瘤细胞的转移，给机体带来许多不利影响甚至威胁生命。以往对血管渗漏性调节机制的研究(如血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial cellsgrowth factor,VEGF)、组胺等)多集中于内皮细胞屏障，而作为微血管壁细胞组分之一的周细胞在渗漏性的调节中所起的作用长期以来被人们所忽略。微血管壁由周细胞与血管内皮细胞组成，二者共同构成了微血管的屏障，是维持内环境稳定的重要因素。近年来由于周细胞在血管生成、稳定和重建中的重要调控作用而日渐受到重视。最近，体外实验证实周细胞与血管内皮细胞的共培养可显著降低内皮细胞对荧光素钠的通透率，且其屏障功能与周细胞和血管内皮细胞的比例呈正相关改变。然而在动物模型中周细胞对新生血管渗漏性是否具有调节作用，目前尚未证实。 本课题建立碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管(Corneal neovascularization，CNV)模型，用伊文氏兰(Evans blue，EB)示踪法检测新生血管渗透率，抗α-SMA和抗CD31分别标记周细胞和血管内皮细胞的双重免疫荧光染色法观察并定量分析血管新生过程中周细胞的募集情况；建立角膜基质层间植入微粒体诱导的大鼠CNV模型，实验性阻断周细胞募集后比较新生血管渗透率的变化，以评价周细胞对新生血管渗漏性的影响。从而进一步完善新生血管渗漏性调节的理论研究；为诱导新生血管成熟，降低渗漏性做出探索；为新生血管性疾病的抗渗漏治疗提供新的策略。 第1章大鼠角膜碱烧伤后新生血管渗漏和VEGF变化的研究。 目的：研究大鼠角膜碱烧伤后新生血管渗透率的变化并探讨VEGF对渗透率的影响。 方法：建立碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型，于术后1，2，3，5，7，10d(各6只眼)伊文氏兰示踪法检测新生血管渗透率，实时定量聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)法检测角膜组织中VEGF-RNA的表达。以正常大鼠角膜(6只眼)作为对照。 结果：正常及碱烧伤后1，2，3，5，7，10d大鼠角膜新生血管渗透率依次为0，1.14±0.17，0.24±0.08，0.294±0.16，0.144±0.10，0.094±0.06和0.05±0.04μg/ml/mm<2>：角膜组织中VEGF-RNA水平依次为1.094±0.31×10<6>，7.01±1.99×10<6>，1.01±0.59×10<6>，2.43±0.43×10<6>，0.99±1.31×10<6>，0.95±0.03×10<6>和0.17±0.15×10<6>拷贝/μg总RNA，其中7d和10d的VEGF-RNA低于正常水平(P<,7d>=0.011，P<,10d>=0.006)。经Pearson相关分析，新生血管渗透率和VEGF-RNA水平呈正相关改变，相关系数为0.866(P<0.01)。 结论：VEGF在新生血管渗漏的调节机制中起着重要作用；大鼠角膜碱烧伤后期，新生血管渗漏性增高难以应用VEGF机制进行解释的现象，提示可能存在其它的新生血管渗漏调节机制。 第2章大鼠角膜碱烧伤后新生血管对周细胞募集的研究。 目的：研究大鼠角膜碱烧伤后新生血管对周细胞的募集并探讨周细胞包裹程度与新生血管渗透率的关系。 方法：建立碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型，分别于术后1，2，3，5，7，10d(各6只眼)采用抗α-SMA和抗CD31对角膜切片行双重免疫荧光染色法及透射电镜观察新生血管对周细胞的募集情况。采用周细胞包裹指数(Pericytecoverage index，MPI)对之进行定量分析。 结果：碱烧伤后早期，血管内皮细胞和周细胞自角膜基质浅层向深层方向生长，血管内皮细胞早于周细胞出现并领先周细胞的发展。至碱烧伤后晚期，角膜基质深层未被周细胞包裹的新生血管开始消退；MPI在碱烧伤后1，2，3，5，7，10d依次为0，16.07﹪，11.95﹪，43.84﹪，73.97﹪和86.21﹪。经Spearman等级相关分析，MPI与新生血管渗透率呈负相关改变，相关系数为．-0.9413(P=-0.005)。 结论：角膜新生血管渗透率与周细胞的包裹程度密切相关；周细胞是新生血管成熟和稳定的关键因素。 第3章周细胞对大鼠角膜新生血管渗漏性影响的研究。 目的：比较阻断周细胞募集过程后角膜新生血管渗透率的改变，探讨周细胞对新生血管渗漏性的影响。 方法：建立角膜基质层间植入微粒体诱生新生血管的大鼠模型，随机分配同一只大鼠的左右眼为实验组和对照组，实验组植入含有VEGF+ami-PDGF-B的微粒体(9只眼)，对照组植入含有VEGF+PBS的微粒体(9只眼)，术后5天伊文氏兰示踪法检测新生血管渗透率，角膜称重，抗α-SMA和抗CD31对角膜切片及全角膜行双重免疫荧光染色法观察并计算周细胞包裹指数。 结果：实验组MPI为11.3﹪，角膜重量为8.96±1.09mg，新生血管渗透率为0.68±0.36μg/ml/mm<2>；对照组MPI为56.5﹪，角膜重量为7.36±0.56mg，新生血管渗透率为0.24±0.07μg/ml/mm<2>，三个指标在实验组和对照组之间比较均有显著性差异(P<,MPI><0.01，P<,渗透率>=0.011，P<,重量>=0.011)。 结论：周细胞对新生血管渗漏性具有重要的调节作用，为新生血管性疾病的抗渗漏治疗提供了理论指导。