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目的:宫颈癌作为最常见的女性生殖系统肿瘤之一,肿瘤细胞对凋亡的耐受进而引起的多重耐药现象(MDR)是晚期宫颈癌治疗中的主要问题。因此,寻找诱导多重死亡方式的药物尤为重要。蟾蜍灵(bufalin)为中华大蟾蜍皮肤和耳后腺分泌物中所提取的重要活性单体成份药物,对包括乳腺癌、胃癌、肺癌和肠癌等多种肿瘤发挥良好抗肿瘤作用。但其对宫颈癌的作用研究较少。自噬(autophagy)是细胞在应激条件下发生的一种重要防御和保护机制,可将受损的细胞器或大分子蛋白进行包裹、降解,产生新的能量物质供细胞循环再利用,从而维持细胞内环境的稳态。在肿瘤的研究中,发现自噬是诱导肿瘤细胞死亡的一种重要方式。本研究拟探讨bufalin对宫颈癌细胞的作用,以及可能机制,为蟾蜍灵在宫颈癌临床治疗中的应用提供有力的理论基础。方法:1.CCK-8法检测bufalin对宫颈癌细胞C33A与HeLa的杀伤作用。2.流式细胞术检测bufalin诱导宫颈癌细胞系凋亡。3.泛caspase抑制剂z-VAD-fmk逆转bufalin对宫颈癌细胞杀伤作用。4.透射电镜观察bufalin作用宫颈癌细胞自噬体形成的影响。5.流式细胞术DCFH-DA探针染色法检测宫颈癌细胞ROS水平。6.Western blot法测定bufalin对LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白及JNK、p-JNK蛋白的表达影响。7.ROS抑制剂NAC及JNK的抑制剂SP600125对bufalin作用的宫颈癌细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达影响。结果:1.Bufalin对宫颈癌细胞C33A与HeLa的杀伤作用呈剂量-时间依赖性。2.Bufalin诱导宫颈癌细胞系凋亡与自噬。3.Bufalin增加宫颈癌细胞系ROS的产生。4.Bufalin激活JNK信号通路。5.ROS抑制剂NAC与JNK抑制剂SP600125能够逆转bufalin引起的LC3-Ⅱ表达的增加。结论:Bufalin可诱导宫颈癌细胞C33A与HeLa发生凋亡与自噬,杀伤宫颈癌细胞系;Bufalin通过ROS/JNK信号通路调节宫颈癌细胞自噬。