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miRNAs是一类内源性约21-23个核苷酸长度的非编码RNA,研究表明miRNAs参与多种生命过程的调节,其异常表达常与疾病发生相关,是潜在的肿瘤诊断及预后标志物。本研究比较了正常细胞和非小细胞肺癌细胞中miR-3653-3p和miR-3200-5p的表达和启动子区DNA甲基化水平,并通过基因过表达和敲除技术结合肿瘤恶性表型检测,对miR-3653-3p和miR-3200-5p在肺癌中的作用及调节机制进行了研究。1、miR-3653-3p在人非小细胞肺癌细胞系A549或H460的中作用及调节qRT-PCR结果显示,与肺正常细胞的相对表达量为100%相比,miR-3653-3p在三种非小细胞肺癌细胞H460、A549和SK-MES-1中的表达量分别为67.74%、28.99%和11.72%,亚硫酸氢盐测序结果表明,miR-3653-3p启动子区DNA甲基化水平分别为61.43%、80%和100%。通过构建和分别转染miR-3653-3p过表达载体miR-3653-pIRES2-EGFP或敲除载体miR-3653-gRNA,结果表明,过表达miR-3653-3p后细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力显著降低,而敲除miR-3653-3p后结果相反。经MirTarget2软件预测BRWD1为miR-3653-3p的靶基因,qRT-PCR结果显示,过表达miR-3653-3p后A549或H460中BRWD1表达量分别降低了 31.93%和52.05%,敲除miR-3653-3p后BRWD1表达量分别升高了 71.87%和53.44%。综合以上结果表明,miR-3653-3p在非小细胞肺癌细胞中表达量与其启动子区DNA甲基化水平负相关,miR-3653-3p可能通过靶向作用BRWD1发挥抑癌作用。2、miR-3200-5p在人非小细胞肺癌细胞系A549或H460中的作用及调节与正常细胞的相对表达量为100%相比,miR-3200-5p在H460、A549和SK-MES-1中的表达量分别为78.69%、47.98%和15.6%,启动子区DNA甲基化水平分别为37.5%、55.830%和70%。构建miR-3200-5p过表达载体miR-3200-pIES2-EGFP及敲除载体miR-3200-gRNA。过表达miR-3200-5p后细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力显著降低,而敲除miR-3200-5p后结果相反。利用MirTarBase软件预测MGLL为miR-3200-5p靶基因,qRT-PCR验证显示过表达miR-3200-5p 后 A549 或 H460 中 MGLL 表达量分别降低了 57.29%和 74.89%,敲除miR-3200-5p后MGLL表达量分别升高了 34.73%和56.7%的结果表明MGLL可能是miR-3200-5p的靶基因。根据MGLL的CDS序列构建过表达载体MGLL-pIRES2-EGFP和干扰载体pRNAT-U6.1-shMGLL/Neo。过表达载体 MGLL-pIRES2-EGFP 转染后 miR-3200-5p的表达量显著降低,干扰载体pRNAT-U6.1-shMMGLL/Neo转染后miR-3200-5p的表达量显著升高。细胞增殖、迁移和侵袭能力等检测表明,MGLL过表达载体与miR-3200-5p过表达载体共转A549或H460细胞后,MGLL可逆转miR-3200-5p过表达载体单独转染对细胞恶性表型的抑制作用。综合以上结果表明,miR-3200-5p在非小细胞肺癌细胞中低表达与其启动子区DNA甲基化水平负相关,miR-3200-5p可能通过靶向作用MGLL抑制肺癌恶性表型,且miR-3200-5p和MGLL之间可能存在相互调节的作用。