金银花与山银花在临床上常存在混用的情况,二者具有相同的功效,均为清热解毒、疏散风热。金银花与山银花也具有相似的化学成分,除主要活性成分有机酸类、黄酮类、皂苷类等成分外,二者还含有一定的多糖成分。多糖成分具有一定的免疫调节活性,目前尚无金银花与山银花多糖结构及免疫调节活性的比较研究。肠道微环境与机体免疫功能具有密切关系,可以肠道微环境作为切入点比较金银花与山银花多糖的免疫调节活性。本研究采用正交试验优化多糖提取工艺,经提取、分离得到金银花与山银花粗多糖,用于多糖免疫调节活性研究;粗多糖经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后的金银花与山银花多糖,用于多糖结构解析;采用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,比较各组小鼠的脏器指数、血清细胞因子、血清免疫球蛋白、肠粘膜免疫球蛋白水平,研究金银花与山银花粗多糖免疫调节活性差异;以免疫抑制小鼠粪便和结肠内容物为研究对象,比较粪便中肠道菌群丰度和结肠内容物中短链脂肪酸水平,研究金银花与山银花粗多糖对肠道微环境的影响;以纯化后的金银花和山银花多糖为研究对象,采用气相色谱研究多糖中的单糖组成,采用紫外光谱研究多糖中是否存在核酸与蛋白质,采用红外光谱研究多糖的糖苷键构型、识别糖键上主要取代基等,采用核磁共振波谱法确定糖苷键的构型、糖链连接位置、异头碳构型等,采用SEM扫描电镜研究多糖的形貌特征。主要研究结果如下:1.多糖超声辅助提取法最佳提取条件为超声时间30 min,超声温度60℃,料液比1:30;采用最佳提取条件分别提取金银花与山银花多糖,二者多糖提取率分别为20.74%和21.53%;金银花与山银花水提液经醇沉、脱蛋白得到粗多糖,二者粗多糖的得率分别为2.16%和2.96%,粗多糖中多糖的含量分别为32.34%和34.92%;粗多糖经柱色谱纯化,得到纯化后的金银花与山银花多糖,纯化后的多糖得率分别为1.15%、1.41%,纯化多糖中多糖含量分别为96.31%、94.15%。即采用最佳提取方法得到的金银花与山银花水提液中山银花多糖含量高于金银花,但无显著差异;经醇沉、脱蛋白得到的粗多糖中山银花粗多糖得率高于金银花,无显著差异;山银花粗多糖中多糖含量显著高于金银花;经柱层析纯化后得到的纯化多糖中山银花多糖得率高于金银花,但无显著性。2.金银花与山银花粗多糖均能显著提高免疫抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数,且高剂量组效果优于低剂量组;二者粗多糖均显著促进免疫抑制小鼠IL-6的分泌,山银花粗多糖显著促进免疫抑制小鼠IL-2、TNF-α的分泌;金银花与山银花粗多糖均显著提高免疫抑制小鼠IgG和IgM的含量,山银花粗多糖可显著提高IgA含量;金银花粗多糖显著提高结肠内容物中SIgA的含量。即金银花与山银花粗多糖对环磷酰胺免疫抑制小鼠免疫功能有显著调节作用,二者间差异不大。3.金银花多糖对于改善免疫抑制小鼠肠道菌群群落丰富度和多样性的活性优于山银花多糖。金银花多糖组和山银花多糖组微生物组成具有一定的相似性,且分别与模型组具有明显差异;金银花多糖组肠道菌群的物种组成相较于山银花更趋向于空白对照组,表明金银花多糖可显著改善免疫抑制小鼠肠道菌群丰富度和均匀度,改善菌群多样性和物种组成,而山银花多糖无显著调节作用,但有一定的改善趋势。金银花和山银花多糖高剂量组显著提高结肠内容物中丙酸、乙酸、正戊酸、异戊酸含量,而金银花多糖各处理组显著增加正丁酸含量。表明金银花和山银花多糖可通过提高结肠内容物中短链脂肪酸含量,提高肠道免疫功能。4.金银花与山银花多糖中的单糖组成种类相同,均为阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖,金银花多糖单糖组成中含量高的单糖为葡萄糖、果糖、甘露糖,山银花多糖单糖组成中含量高的单糖为葡萄糖、鼠李糖、甘露糖,即金银花与山银花多糖单糖组成的种类相同,各单糖的相对含量存在一定差异;经紫外光谱扫描,金银花与山银花多糖中均不含核酸与蛋白质;金银花与山银花多糖红外光谱图并无显著差异,推测应具有相似的糖苷键构型,二者均存在多糖特征吸收峰、β-糖苷键与α-糖苷键特征吸收峰、吡喃糖苷键特征吸收峰等;1H-NMR与13C-NMR图谱表明金银花与山银花多糖结构并无显著差异,结合二者单糖组成及红外光谱分析,金银花与山银花多糖中以α-D-葡萄糖为主,还有一定的β-D-果糖;扫描电镜下金银花与山银花多糖总体均为表面光滑紧密的片状结构,在高倍镜下可观察到山银花断面具有多层次片状结构且局部表面具有不规则纹理,而金银花多糖中并未观察到此结构。即金银花与山银花多糖在结构上具有一定差异,但相似度更高。综上金银花多糖与山银花多糖在提取率、结构、免疫调节活性上具有一定的差异,但总体差异较小,相似度很高。本研究可为金银花与山银花多糖的结构差异及其免疫调节活性的评价提供一定的依据,并可为金银花与山银花多糖保健品的开发提供一定参考。