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猪传染性胸膜肺炎(porcinepleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae，APP)引起的猪的一种严重的接触性传染病，已给养猪业造成了巨大的经济损失。在我国目前主要应用传统的灭活疫苗对该病进行预防，但APP有15个血清型，灭活疫苗免疫猪只能提供抵抗同一血清型菌株感染的能力，对其他菌株的感染没有或仅有较弱的保护。因此，研制高效的疫苗已成为研究热点。目前，几种纯化的抗原包括Apx毒素、脂多糖和外膜蛋白已经作为疫苗候选，然而每种抗原只能提供有限的保护力，表明一种有效的交叉保护性疫苗可能包括几种抗原。研制有效的胸膜肺炎疫苗的有效办法是疫苗中包括尽可能多的特征性重组抗原。本研究应用表达文库免疫(ExpressionLibraryImmunization,ELI)的方法筛选APP基因组文库，期望获得免疫保护性抗原基因，为研制新型疫苗奠定基础。
本试验以我国流行的胸膜肺炎放线杆菌7型25-4地方分离株为研究对象，提取细菌基因组，用限制性核酸内切酶MboⅠ将基因组部分酶切，回收大小为0.5～2.5kb的DNA片段，将其与经同尾酶BamHⅠ切割并去磷酸化的真核表达载体pcDNA3.1连接，转化大肠杆菌DH5α宿主，得到10个DNA表达文库(L1～L10)，文库总容量为105个克隆；然后应用表达文库免疫(ELI)的方法，将10个文库提取的重组质粒纯化后，分别免疫10组(n=10)Balb/c小鼠(L1～L10)，pcDNA3.1组和PBS组做为对照组免疫，共免疫3次，免疫间隔3周，3免结束后2周对小鼠攻以APP1型强毒，攻毒剂量为5×109cfu/只，观察各组小鼠在攻毒后20天内的存活率，并在攻毒后第6天无菌采取小鼠左全肺计算肺组织荷菌数(cfu/mg)，从相对保护率、肺脏荷菌数和组织病理学变化三方面评价文库抵抗APP1型菌感染的交叉保护力，选出保护力好的两组文库L2和L3，每个重新分割为四个亚文库(L2-1～L2-4，L3-1～L3-4)，继续进行小鼠基因免疫试验，同样3次免疫结束后对小鼠攻以APP1型强毒，攻毒剂量为5×109cfu/只，从相对保护力、肺脏荷菌数、组织病理学3方面综合评价亚文库的抵抗APP1型强毒的交叉保护力，最后选出保护力最好的一组亚文库L3-4，挑选20个菌落进行核苷酸测序，测序结果上用NCBI的BLAST做序列比对，共得到13个开放阅读框(openingreadingframe,ORF)，其中的腺苷酸环化酶基因以及膜蛋白cbiK、cbiL可能是毒力相关基因。