据报道梨病毒病对我国北方梨造成了严重损失。栽培无病毒苗木是当前解决梨病毒危害的有效途径，病毒检测是培育和繁殖无病毒苗木的重要环节。本试验以砂梨为材料，对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果茎痘病毒(ASPV)三种梨树上重要病毒的快速检测方法和对带毒样品的脱毒技术进行了研究，取得了以下结果： 在温室，通过汁液摩擦接种用草本指示植物检测10个待检砂梨样品，其中，8个表现ACLSV症状，2个表现ASGV症状，1个表现ASPV症状；通过二重芽接法用木本指示植物对以上10个样品进行检测，其中，5个表现ACLSV症状，3个表现ASGV症状，7个表现ASPV症状。结果表明，ACLSV采用草本指示植物检测，ASPV和ASGV采用木本指示植物检测，症状明显，结果更可靠。 采用常规的PAS-ELISA、改进的PAS-ELISA和直接包被抗原ELISA(PTA-ELISA)，检测来源于苹果的ACLSV-C和梨的ASGV显示，通过将第二抗与酶标A蛋白预反应后混合加入，可降低非特异反应，提高阳性样品和阴性样品的吸光度比值(P／N)；常规PAS-ELISA与PTA-ELISA检测的结果一致。采用斑点免疫印迹法(Dot-ELISA)对梨样品等倍稀释检测ASGV，结果表明，稀释512倍后，阳性反应和阴性反应有明显差异，较改进的PAS-ELISA灵敏。用以上方法对待检梨样品木本材料及接种发病的草本指示植物均不能检测出ACLSV，这表明，梨样品所带的ACLSV可能与所用来源于苹果ACLSV-C的抗体血清学反应较弱。 采用IC／TC-RT-PCR检测ACLSV-C接种的昆诺藜，均获得了约358bp的目标片段，但IC-RT-PCR所得扩增带相对较弱。采用以上两种方法及RT-PCR检测ASGV-3接种的昆诺藜，均获得了约499bp的目标片段，三种方法检测结果一致，相对于RT-PCR，前两种方法不用制备植物总核酸，简化了操作程序和要求。在此基础上，采用IC／TC-RT-PCR对梨样品的ACLSV和ASGV进行了检测，两种方法检测结果一致，但TC-RT-PCR检测ACLSV较IC-RT-PCR所得目标带拷贝数多，这亦可能是由以上所述ACLSV与所用抗体血清学反应较弱引起。用随机引物反转录，通过TC-RT-PCR检测ACLSV和ASGV复合感染的梨样品也均获得了目标片段。采用IC-RT-PCR检测2个梨样品的ASPV得到了较弱的约316bp的目标片段。 采用茎尖分离获得田问砂梨样品的4个离体苗，对复合感染ACLSV、ASGV和ASPV的2个样品通过病毒净与茎尖培养相结合处理，采用改进的PAS-ELISA、Dot-ELISA和TC-RT-PCR检测9株继代脱毒苗，所有检测培养株均未脱除ACLSV，2个脱除了ASGV，1个脱除了ASPV。 综上所述，本试验建立的梨病毒ACLSV和ASGV的分子生物学检测方法相对血清学检测结果更加稳定可靠，与指示植物检测结果基本一致，但抗体质量对IC-RT-PCR检测效果影响较明显，对ASPV的检测还有待完善。