分化抑制因子(Id)，属于螺旋一环．螺旋(HLH)转录因子家族成员之一，对碱性HLH(bHLH)转录因子活性起负调节作用。哺乳动物细胞含四种Id分子(Idl～Id4)。Id3蛋白的表达和功能涉及许多复杂的调控机制，Id3在不同种类的肿瘤中具有截然不同的表达谱。 本课题采用RT-PCR技术在多种人肿瘤细胞株，包括Burkitt’s B淋巴瘤细胞(Daudi)、T淋巴细胞性白血病细胞(Jurkat)、慢性髓性白血病细胞(K562)、组织细胞性淋巴瘤细胞(U937)、前列腺癌细胞(PC-3M)、肺癌细胞(A549)、胃癌细胞(BGC)、卵巢癌细胞(COC2)，以及40例血液系统恶性肿瘤患者和15例健康人外周血单个核细胞(PBMC)，对以上细胞中Id2和Id3 mRNA的表达水平进行检测分析。结果发现，Id2在健康人PBMC和多种肿瘤细胞中均呈普遍高表达趋势；Id3在健康人PBMC中未见表达，在肿瘤细胞中有低度表达，且Id3在不同肿瘤细胞中的表达程度具有较大的差异性，PC-3M和A549细胞中Id3表达量较高，Daudi次之，K562最低。另外，Id2和Id3 mRNA在血液病患者PBMC中也均有不同程度的表达。总体上Id3的表达水平普遍明显低于Id2的表达。Id3可能在肿瘤的发生、发展中扮演某种重要的角色。 本实验在成功克隆人Id3基因的基础上，构建Id3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因真核表达载体Id3／pEGFP-N1。利用脂质体转染技术将空载体pEGFP-N1和重组载体Id3／pEGFP-N1转入人肺癌细胞A549，转染后，激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP-Id3融合蛋白的细胞在488nm激发光下发出强绿色荧光；流式细胞仪分析表明，A549细胞转染pEGFP-N1和Id3／pEGFP-Nl48h后，EGFP阳性表达率分别可达65.42％和60.50％。转染后细胞：Id3 mRNA的表达量可达到转染前的近4倍；鼠抗人Id3单克隆抗体能与Id3／pEGFP-N1转染细胞特异性结合，证明Id3蛋白在A549细胞中得到有效表达。通过G418筛选，获得稳定表达EGFP及EGFP-Id3的A549细胞。流式细胞术检测细胞周期发现，Id3／pEGFP-N1转染的A549细胞S期和G2期细胞比例均明显高于DEGFP-N1转染细胞组和未转染细胞组，表明Id3基因的导入可诱导A549细胞从G1期向G2期的发展，从而促进细胞增殖。真核表达载体Id3／pEGFP-N1的成功构建及其在A549细胞中的表达及Id3基因功能的分析，为研究Id3蛋白在肿瘤细胞增殖及细胞生长调控中的作用奠定了实验基础。