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目的检测大肠癌患者肿瘤组织细胞HLA-I类分子及相应患者外周血CK20mRNA的含量,研究其与大肠癌临床病理之间的关系,探讨HLA-I类分子在大肠癌发生与转移中的作用。方法81例大肠癌患者术中取癌组织及癌旁粘膜组织,采用免疫组化S-P染色检测HLA-I类分子;相应大肠癌患者于术前及正常对照组均取外周血收集单个核细胞,应用荧光定量-PCR检测CK20mRNA含量,以CN表示,1CN=1拷贝/毫升,设10~4CN为阈值,≥10~4CN为CK20mRNA阳性表达。实验数据应用SPSS13.0统计软件进行分析。结果一、大肠癌患者癌组织HLA-I类分子表达1、81例大肠癌患者癌旁组织HLA-I类分子均为阳性,而癌组织中HLA-I类分子仅有35例阳性,阳性率为43.2%(35/81),二者比较差异有统计学意义(p＜0.001)。2、依据大肠癌Dukes分期,癌组织细胞HLA-I类分子阳性率依次为;A期73.3%、B期55.6%、C期25.9%、D期16.7%,组间比较,差异有统计学意义,P＜0.01;各期两两比较;A期与C期、A期与D期、B期与C期、B期与D期之间差异均有统计学意义,P＜0.01。3、大肠癌转移组患者癌组织HLA-I类分子阳性率为23.1%(9/39),未转移组为61.9%(26/42),转移组显著低于未转移组,差异有统计学意义(P＜0.01);HLA-I类分子表达阳性率随大肠癌转移淋巴结个数增多而降低(P＜0.01)。4、大肠癌肿瘤细胞高分化组13例患者中HLA-I类分子阳性率76.9%;中分化组51例大肠癌患者中阳性率41.2%;低分化组17例大肠癌患者中阳性率23.5%。大肠癌患者癌组织HLA-I类分子阳性率随大肠癌组织细胞分化程度的降低呈下降趋势(P=0.005)。5、依据大肠癌浸润程度分组,癌组织HLA-I类分子阳性率分别为;已浸透浆膜组29.4%,未浸透浆膜组53.2%,组间比较,P=0.034;浸润达肌层组与浸润达浆膜组HLA-I类分子阳性率比较,P=0.017;浸润达肌层组与浸透浆膜组HLA-I类分子阳性率比较,P=0.002,差异均有统计学意义。二、大肠癌患者外周血CK20mRNA表达1、30例正常对照组外周血均不表达CK20mRNA,81例大肠癌患者中有30例外周血CK20mRNA表达量＞10~4CN,表达率为37.0%,经统计学处理两组具有显著性差异,P＜0.01。2、81例大肠癌患者DukesA、B、C、D期外周血中CK20mRNA的表达率依次为13.3%,22.2%,44.4%,83.3%,随分期进展表达率显著上升,其差异具有统计学意义,P＜0.01。定量分析结果显示,大肠癌患者外周血CK20mRNA拷贝数与肿瘤分期呈正相关,r=0.500,P＜0.001。大肠癌Dukes分期越晚,CK20mRNA的拷贝数越高。3、转移组大肠癌患者外周血CK20mRNA表达率56.4%(22/39),未转移组表达率19.0%(8/42),两组间具有显著性统计学差异,P=0.003。转移组外周血CK20mRNA拷贝数明显高于未转移组,两组间差异具有显著统计学意义,P＜0.001,外周血CK20mRNA拷贝数与肿瘤转移正相关,r=0.433,P＜0.01。大肠癌转移至肝或肺的患者外周血检测到CK20mRNA表达率达88.9%(8/9);转移至局部组织器官患者的表达率为40.9%(9/22);未发现转移患者的表达率仅为26.0%(13/50),各组间两两比较,差异均有统计学意义,P＜0.05。大肠癌患者外周血CK20mRNA拷贝数与肝/肺转移正相关,r=0.449,P＜0.01。4、大肠癌患者外周血CK20mRNA表达量与肿瘤转移淋巴结数目正相关,r=0.417,P＜0.01;转移淋巴结个数多者外周血CK20表达量上升,差异具有统计学意义,P＜0.001。5、随着肿瘤浸润程度的加深,大肠癌浸润达肌层组、浸润达浆膜组、浸润透浆膜组外周血CK20mRNA表达量呈上升趋势,组间具有统计学差异,P=0.006,外周血CK20mRNA量与肿瘤浸润程度正相关,r=0.518,P＜0.01。大肠癌患者外周血CK20mRNA量在肿瘤直径不超过5cm组和超过5cm组之间比较,差异无统计学意义,P=0.135。三、大肠癌患者癌组织HLA-I类分子与外周血CK20mRNA表达的关系1、81例大肠癌患者,外周血CK20mRNA表达的30例中22例癌组织HLA-I类分子表达缺失,缺失率73.3%,51例外周血CK20mRNA不表达者中24例癌组织HLA-I类分子表达缺失,缺失率47.1%,二者差异具有统计学意义,P=0.018。2、大肠癌癌组织HLA-I类分子阴性患者的外周血CK20表达量显著高于HLA-I类分子阳性者,两组比较有统计学差异,P=0.002;大肠癌癌组织HLA-I类分子与外周血CK20mRNA量负相关,r=0.555,P=0.002。结论1、大肠癌患者肿瘤细胞HLA-I类分子的表达存在缺失,且与大肠癌Dukes分期密切相关,HLA-I类分子缺失在大肠癌发生发展中起重要作用。2、大肠癌患者肿瘤细胞HLA-I类分子缺失率随细胞分化程度的降低、肿瘤浸润程度的加深和肿瘤转移而升高,HLA-I类分子缺失与大肠癌细胞分化和侵袭转移密切相关。3、大肠癌患者外周血CK20mRNA表达率随Dukes分期及转移均上升,其含量与大肠癌Dukes分期、浸润、转移均呈正相关,外周血CK20mRNA与大肠癌进展和转移密切相关,可作为检测大肠癌微转移的标志物。4、大肠癌患者癌细胞HLA-I类分子与外周血CK20mRNA含量密切相关,HLA-I类分子表达缺失者CK20mRNA含量升高,其联合检测可为大肠癌诊断提供依据。