论文部分内容阅读
目的从肺痿论治肺纤维化是近年中医临床专家通过总结古籍和临床实践达成的共识,而肺痿论治所使用的麦门冬汤和甘草干姜汤对肺功能的实验研究未见报道。本课题系统研究两副汤剂对肺纤维化大鼠模型的干预作用,比较两个古方对实验性肺纤维化大鼠肺功能的影响和相关细胞分子机制,以探索肺痿论治的实验效果和可能机制,为临床提供药理基础和新的用药思路。方法本实验对80只SD大鼠采用气管内注射5mg/kg的博莱霉素进行肺纤维化造模。随机分组为正常对照组,肺纤维化模型组,麦门冬汤高(30g/kg)、中(15g/kg)、低(7.5g/kg)剂量组和甘草干姜汤高(15g/kg)、中(7.5g/kg)、低(3.75g/kg)剂量组。造模一周内,定时定点称重一周,造模14天后进行灌胃,正常组不予任何处理,模型组用生理盐水灌胃,用药组按1ml/100g(药液体积/体重)灌胃,每天一次。(1)检测各组大鼠的肺功能指标:用力肺活量(FVC)、肺动态顺应性(Cdyn)、0.4秒率(FEV0.4/FVC%)、呼气峰值流速(PEF)、最大呼气中期流速(MMF)等;(2)检测大鼠动脉血氧分压、二氧化碳分压、血氧饱和度等;(3)HE、Masson、天狼星红染色观察各组大鼠的肺组织病理学变化;(4)用免疫组化方法检测血管新生相关因子VEGF、CD31和第Ⅷ因子在肺组织中的表达情况。结果(1)脏器质量和脏器系数分析:相对于正常组,模型组大鼠体重显著下降(P<0.05)。模型组大鼠由于炎症和细胞外基质沉积造成肺脏质量、肺脏系数增加显著(P<0.05),麦高组能够降低病变肺脏的质量和肺脏系数(P<0.05)。(2)肺功能分析:模型组与正常组大鼠相比PEF和MMF均降低(P<0.05),提示存在气道阻碍;结合FVC比正常组显著降低,降幅超过80%(参考临床),而0.4秒率(FEV0.4/FVC%)升高(P<0.05),提示博莱霉素所致肺纤维为限制性伴阻塞性(或限闭性)肺功能障碍。高剂量麦门冬汤和甘草干姜汤能够提高模型动物FVC(P<0.05),甘中组则降低模型动物的0.4秒率(P<0.05),同时改善气道阻力(P<0.05)。(3)血气分析:模型组大鼠的动脉血氧分压(P02)和血氧饱和度(S02)相对于正常组下降(P<0.05)。两种药液的各剂量组之间血气结果未见显著差异,故将各组检测结果合并对两种药液进行比较发现:甘草干姜汤总体能够提高P02和S02(P<0.05),麦门冬汤总体则只是单纯升高P02,未见S02与模型组有显著性差异。(4)病理观察结果:纤维化的大鼠肺组织可分为实变区区和相对非实变区。非纤维化区的HE、MASSON病理观察结果显示:正常组肺泡结构完整、排列整齐;模型组可见肺泡间质内成纤维细胞增生,肺泡腔增大;麦门冬汤中剂量组大鼠的肺间质也明显可见成纤维细胞填充、红细胞分布减少;甘草干姜汤中剂量组大鼠的肺间质中成纤维细胞减少。天狼星红染色结果:正常组有少量胶原多分布于基底膜组织,模型组纤维化区域胶原大量合成形成过度沉积,两组比较有统计学差异(P<0.05)。其中麦门冬汤中、高剂量组和甘草干姜汤的中、高剂量组均在一定程度上能减少胶原的沉积,降低胶原的含量。(5)免疫组化结果:正常大鼠肺组织中VEGF表达较少,模型组大鼠病变区肺组织有大量的VEGF表达,两组之间有的统计学差异(P<0.05)。麦门冬汤和甘草干姜汤高剂量组均能降低模型动物实变区VEGF的表达和新生微血管密度(P<0.05),而甘草干姜高剂量组还能够进一步减少模型大鼠肺组织非实变区VEGF的表达和新生微血管,增加功能血管数量。结论:麦门冬汤和甘草干姜汤对于博莱霉素所致大鼠肺纤维化均具有改善作用,前者主要通过降低纤维化肺组织中胶原的沉积改善肺功能,后者可能主要通过抑制纤维化肺组织中异常的血管增生来改善血气。