基于蛋白质组学技术筛选食管鳞癌相关蛋白的研究

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食管癌是最常见的恶性肿瘤之一,死亡率位于所有恶性肿瘤的第6位。其分布遍及世界各地,我国发病率居全世界之首,其发病率和死亡率在我国全部恶性肿瘤中均居第四位。目前,外科手术仍然是食管癌的主要治疗手段。虽然已经做了大量的工作来提高食管癌的治愈率,但食管癌的诊断和治疗效果仍难以令人满意。早期诊断和合理治疗是降低食管癌患者死亡率的有效措施,但在医院接受治疗的食管癌患者大多数处于较晚期,总体治疗效果不佳。有效的早期分子标志物将为临床上食管癌的早期诊断提供新的参考资料,但目前尚未找到十分有价值的用于食管癌早期诊断与治疗的分子标志物。   随着人类基因组计划的完成,蛋白质组学已成为后基因时代的研究热点。蛋白质是基因功能的体现者,许多疾病过程均在蛋白质水平有所体现,肿瘤细胞的突变最终要通过转录和翻译成蛋白质来实现其表型。因此,蛋白质组学可从一个新的角度来阐明肿瘤发生机理,将为食管癌的诊断和治疗提供新的参考依据。   目的:⑴探讨影响胸中段食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的预后的临床病理因素及合理的淋巴结清扫范围;⑵联合应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析技术筛选食管鳞癌相关蛋白;⑶应用酶链免疫法(ELISA)验证候选蛋白,证明蛋白质组学技术筛选出的相关蛋白点结果可靠。   方法:①对129例经现代二野淋巴结清扫术的胸中段食管鳞癌患者的临床资料进行回顾性分析,探讨影响胸中段食管鳞癌预后的临床因素及合理的淋巴结清扫范围;②应用双向凝胶电泳技术建立正常人及食管鳞癌患者(Ⅰ~Ⅲ期)血清蛋白质指纹图谱;③分析对比正常人及食管鳞癌患者(Ⅰ~Ⅲ期)蛋白质指纹图谱,筛选出差异表达蛋白点;④应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted LaserDesorption/Ionization Mass Spectrometric Analysis time-of-flightmass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析技术对筛选出的差异蛋白点进行分析鉴定;⑤应用酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测候选蛋白结合珠蛋白(Haptoglobin,HP)和血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)在食管鳞癌患者和正常人血清中的表达差异。   结果:⑴COX模型多因素生存分析显示肿瘤长度、浸润深度、细胞分化程度及淋巴结转移度对预后有显著影响;⑵联合应用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析技术发现,有2个蛋白点食管鳞癌患者血清中表达下调,分别为:甲状腺素转运蛋白(transthyretin,TTR)和过氧化物还原酶Ⅱ(PeroxiredoxinⅡ);⑶联合应用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析技术发现,有2个蛋白点在食管鳞癌患者血清中表达上调,分别为:结合珠蛋白和血清淀粉样蛋白A;⑷联合应用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析技术发现,有2个蛋白点仅在局部晚期食管癌患者血清中表达上调,分别为:载脂蛋白A1(Apolipoprotein A-1,Apo-A1)和细胞角蛋白1(Cytokeratin1).;⑸酶联免疫法检测显示,结合珠蛋白在食管鳞癌患者血清中表达明显上调,其表达量与食管鳞癌分期无关;⑹酶联免疫法检测显示,血清淀粉样蛋白A在食管鳞癌患者血清中表达明显上调,其表达量随食管鳞癌分期后移而逐渐上调。   结论:①肿瘤长度、浸润深度、细胞分化程度及淋巴结转移度对食管鳞癌患者预后有显著影响;②淋巴结转移度是判断食管鳞癌患者预后的一个重要因素;③联合应用联合应用双向凝胶电泳和质谱分析技术可用于筛选食管鳞癌相关蛋白,为食管鳞癌的诊断和治疗提供新的参考依据;④血清淀粉样蛋白A和结合珠蛋白在食管鳞癌患者血清中表达上调,可能是参与食管鳞癌发生发展的有价值的分子标志物。
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