胃癌中医证型与BCL-2、bax基因表达相关性研究

来源 :陕西中医学院 陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:skyeyviva
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目的:  本次研究是通过大样本的临床标本的收集,探索胃癌中医证型与目前已知的BCL-2、bax,2个胃癌标志物基因表达的相关性。通过组间的差异性分析,为胃癌中医证型分类提供理论和实验依据。对阐明基因与中医证候之间的关系,认识胃癌的发生机制,预测其转归,也是探求中医证候实质的关键所在。  方法  收集陕西中医学院第一附属医院2011年5月至2013年2月胃癌住院手术病人120例,收集病人的相关病史、术中情况和中医证候四诊等相关信息,依据ITAC2007国际中医药肿瘤学术大会颁布的《中医胃癌诊疗指南(草案)》[1],将所有病人分为:肝气犯胃型、胃热伤阴型、瘀毒内阻型、痰湿凝结型、脾胃虚寒型、气血亏虚型共6组,采用免疫组化法检测6组患者胃癌病理切片局部BCL-2、bax表达值,从而找出这两项指标在胃癌的中医证型中的分布的规律和特点,为胃癌的发病机制和胃癌的中医症候实质所在提供理论及实验支持。  1.此次研究按照胃癌中医分型共收集120个病例,其中肝气犯胃型共23例,占19.2%;胃热伤阴型共21例,占17.5%;瘀毒内阻型共18例,占10.0%;痰湿凝结型共16例,占13.3%,脾胃虚寒型共29例,占24.2%;气血亏虚型共13例,占10.8%。其中脾胃虚寒型最多,证候所占比例从多到少为:脾胃虚寒型>肝气犯胃型>胃热伤阴型>瘀毒内阻型>痰湿凝结型>气血亏虚型。  2.采用免疫组化法检测BCL-2和bax表达,组织切片脱蜡和水化,将切片浸泡在柠檬酸钠缓冲液中微波抗原修复。以0.3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶和生物素,血清封闭,分别滴加BCL-2和bax一抗(工作浓度均为1:100)、4℃过夜孵化。加入标记的二抗孵育。加入DAB显色后苏木精复染、透明,封片。以PBS替代作为阴性对照,用已知阳性切片为阳性对照[2]。  3.结果分析:BCL-2阳性表达时主要表现为细胞核和(或)细胞质中呈现棕褐色。bax表达阳性时主要表现为细胞质呈现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。对免疫组化结果评分采用密度和强度结合标准。结果判断:每张胃癌切片随机选取5个视野,每个视野计数50个细胞,分别根据染色强度和密度进行评分。①染色强度:阴性为0分;淡黄色为1分;棕黄色计2分;棕褐色计3分。根据一个视野内阳性细胞所占比例;<1%计0分;1%至25%计1分;25%至50%计2分;>50%计3分,结果按照标准公式计算。分为阴性(-)、弱阳性(+)、中等阳性(++)、强阳性(+++)四个等级  结论:  1.胃癌的中医证型分布有规律可循,其分布规律为:脾胃虚寒型>肝气犯胃型>胃热伤阴型>瘀毒内阻型>痰湿凝结型>气血亏虚型。  2.胃癌证型演变依照以下规律①以本虚辨证总体中医辨证是由肝胃不和向气血双亏发展,由阴虚发展为阳虚。②以标实辨证法分析演变顺序为脾胃虚寒-气滞血瘀—痰湿凝结及瘀毒内阻。  3.Bcl-2、Bax与胃癌肿瘤分级、分期关系。Bcl-2、Bax在胃癌肿瘤不同肿瘤分级、表达不同,但与肿瘤临床病理分期无明显相关性。  4.胃癌中医证候与胃癌相关基因Bcl-2、Bax存在关联性,为中医辨证分型提供准确的切入点和客观理论依据。为中医靶向辨证施治提供有力证据。
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