目的:肝移植是各种终末期肝病的首选及唯一有效手段,然而在肝移植围术期会发生移植肝的缺血再灌注(IR)损伤,作为边缘供体的脂肪变性供肝尤为敏感,会进一步加重肝损伤。程序性坏死参与缺血再灌注损伤的过程中,RIP1是程序性坏死中一个关键的细胞信号转导中心,来调节细胞反应并决定细胞凋亡或坏死。Necrostatin-1(Nec-1)是一种ATP竞争性变构抑制剂,可有效拮抗RIP1活性。本研究旨在借助Nec-1探究RIP1介导的程序性坏死在脂肪肝缺血再灌注损伤中的作用。方法:选择6周龄健康雄性Wistar大鼠32只,体重160~180g,随机分为4组,其中8只普通饲料喂养12周,其余大鼠高脂喂养12周制备成脂肪肝模型后,采用随机数字表法分为三组,每组8只:假手术组(SD组,普通饲料喂养,只进行开关腹操作);高脂饲养假手术组(HFD组,只进行开关腹操作缺血);脂肪肝缺血再灌注损伤组(HFD+IR组,高脂饮食喂养12周,随后采用大鼠冷缺血再灌注模型)、Nec-1给药组(HFD+IR+Nec-1组,高脂饮食喂养12周,建立大鼠冷缺血再灌注前5min经尾静脉注射Nec-1 1mg/kg,麻醉及手术操作同IR组)。再灌注6h后,经肝下下腔静脉抽取血液,采用全自动测定血清天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平。留取肝组织,HE染色法光镜下观察肝组织病理改变,Suzuki’s评分评估各组肝损伤程度。采用ELISA法测定肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的变化水平及氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶SOD水平。采用蛋白质免疫印迹试验(western blot)法测定肝细胞受体相互作用蛋白1(RIP1)、细胞受体相互作用蛋白3(RIP3)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)的表达水平。采用免疫组织化学法测定细胞内程序性坏死执行蛋白MLKL表达情况。结果:与SD组相比,其余各组大鼠血清ALT、AST浓度均升高,病理学检查肝组织损伤严重,脂肪变性明显,汇管区炎性细胞浸润。HFD+IR组肝损伤最为明显,大量炎症细胞浸润,氧化应激反应增强,程序性坏死相关蛋白RIP1、RIP3、MLKL表达显著升高。给予抑制剂Nec-1后血清ALT、AST浓度降低,肝组织损伤程度减轻,炎性细胞减少,氧化应激指标水平明显下降。蛋白质免疫印迹试验显示应用Nec-1后肝组织中RIP1、RIP3、MLKL蛋白水平显著下调,免疫组织化学法测定肝组织内MLKL蛋白表达较未使用抑制剂模型组明显下降。结论:程序性坏死参与了脂肪肝大鼠缺血再灌注损伤的过程,Necrostatin-1通过抑制RIP1介导的程序性坏死对脂肪肝大鼠缺血再灌注损伤起保护作用。